[发明专利]一种哺乳动物胚胎腭突体外旋转培养方法

摘要

本发明公开了一种哺乳动物胚胎腭突体外旋转培养方法。培养腭突的方法包括下列步骤：（1）解剖显微镜下取材；（2）培养箱中培养；（3）第一次换液；（4）第二次换液；（5）降速。本发明的培养仪设计独特、结构紧凑、独立供电、操作方便。培养方法模拟腭突器官在近交系小鼠体内的显微环境，维持器官内部的发育分化以及结构与功能特征，可以更加直观地观察和研究腭突器官的发育及分化过程。

主权项

一种哺乳动物胚胎腭突体外旋转培养方法，其特征在于，包括下列步骤：（1）将孕13.5天的近交系小鼠脱颈处死，在75%的酒精中浸泡消毒；无菌环境下，取出胚胎，在解剖显微镜下解剖取材，将胚胎上的融合前的腭突组织取出；（2）将腭突组织放置于直径为3cm的培养皿内的微孔滤膜上并加入培养液，并保证滤膜漂浮在培养液表面；将置有腭突组织的培养皿放入旋转培养仪，设定旋转培养仪的转速为30‑40转/分钟；将旋转培养仪放到含有5%的二氧化碳、37℃的培养箱中培养；（3）第一次换液：步骤（2）培养24h后，无菌条件下取出旋转培养仪并更换培养皿中的培养液，加入相同体积和成分的培养液，然后在培养液中额外加入壳聚糖和叶酸，壳聚糖、叶酸、培养液的重量比是3‑4：1‑2：10；同时将旋转培养仪的转速匀速升高到50‑60转/分钟；（4）第二次换液：步骤（3）培养12h后，无菌条件下取出旋转培养仪并更换培养皿中的培养液，加入相同的培养液，然后在培养液中额外加入牛血清白蛋白（BSA）和聚乙二醇，牛血清白蛋白（BSA）、聚乙二醇、培养液的重量比是2‑5：1‑3：10；同时将旋转培养仪的转速降低为20‑25转/分钟；（5）步骤（3）培养6h后，将旋转培养仪的转速匀速降低到零，旋转培养仪静止后，继续培养，直到腭突组织的双侧腭突完全融合，培养结束。