[发明专利]一种斑点叉尾鮰致病性鲁氏耶尔森氏菌的保藏方法

摘要

本发明涉及一种斑点叉尾鮰致病性鲁氏耶尔森氏菌的保藏方法，所述保藏方法如下：1)培养基准备：脑心浸出液琼脂培养基倒平板，将适量无菌磁性有序介孔介质均匀分布于平板上备用；2）鲁氏耶尔森氏菌的诱导培养：将鲁氏耶尔森氏菌接种于步骤1）的脑心浸出液琼脂培养基平板上，于25~28℃恒温培养12‑36h；2)鲁氏耶尔森氏菌的保藏：挑取适量上述培养结束的培养基连同无菌磁性有序介孔介质放入无菌具塞塑料离心管中，加入适量无菌蒸馏水和pH5.5‑5.8的葡萄糖琼脂培养基于无菌具塞塑料离心管中，置于0‑4℃恒温冰箱保藏。本发明的方法鲁氏耶尔森氏菌保藏18个月仍生长正常，而且形态特征未发生明显改变，与传代培养保藏法相比保藏期更长，与冷冻干燥保藏法相比，操作更简易，可靠性更高。

主权项

1.一种斑点叉尾鮰致病性鲁氏耶尔森氏菌的保藏方法，其特征在于，所述保藏方法如下：1）培养基准备：脑心浸出液琼脂培养基倒平板，将适量无菌磁性有序介孔介质均匀分布于平板上备用；2）鲁氏耶尔森氏菌的诱导培养：将鲁氏耶尔森氏菌接种于步骤1）的脑心浸出液琼脂培养基平板上，于25~28℃恒温培养12‑36h；3）鲁氏耶尔森氏菌的保藏：挑取适量上述培养结束的培养基连同无菌磁性有序介孔介质放入无菌具塞塑料离心管中，加入适量无菌蒸馏水和pH5.5‑5.8的葡萄糖琼脂培养基于无菌具塞塑料离心管中，置于0‑4℃恒温冰箱保藏；所述磁性有序介孔介质为磁性有序介孔铁酸镍，其制备方法如下：1）将Ni(NO₃)₂·6H₂O和Fe(NO₃)₃·9H₂O溶解于甲醇中，将适量多孔硅KIT‑6放入盛有正己烷的聚四氟乙烯容器中，充分搅拌；2） 将步骤1）中Ni(NO₃)₂·6H₂O和Fe(NO₃)₃·9H₂O的甲醇溶液逐滴加入步骤1）中盛有正己烷和适量多孔硅KIT‑6的聚四氟乙烯容器中，所形成的混合溶液充分搅拌，于50‑60℃加热8‑12h；3）步骤2）所得固体于250‑280℃下灼烧4‑5h；4） 将步骤3）所得固体冷却至室温，经研磨后转移至盛有NaOH溶液的圆底烧瓶内，于40‑50℃水浴条件下回流搅拌24‑36h后离心回收；5）将步骤4）所得固体分别用乙醇和去离子水反复清洗至中性后，经真空干燥即可。