[发明专利]快速分离纯化茶花花腐病菌的方法及其专用培养基

摘要

本发明公开了一种分离纯化茶花花腐病菌的专用培养基，称取麦麸200g，加入蒸馏水，煮沸后过滤，滤液中加入葡萄糖和琼脂，蒸馏水定容，灭菌后冷却至40～50℃时加入利福平摇匀，得专用培养基。本发明还同时提供了一种分离纯化茶花花腐病菌的方法，依次进行以下步骤：采集疑似感染了山茶花腐病的山茶花花瓣，将所得病样进行预处理和消毒，将所得的消毒后样品进行四周边缘处的修剪后放入专用培养基进行接种培养至长出菌丝为止；将所得的菌丝进行纯化培养，直至获得纯菌种。

主权项

1.分离纯化茶花花腐病菌的方法，其特征是依次进行以下步骤：1)、病样的采集：采集感染了山茶花腐病的山茶花花瓣；2)、病样的预处理和消毒：将步骤1)所得的花瓣进行如下处理：以病健交界处为中心线进行花瓣取样，切取病健部分共长度为2×2cm的部分作为样品，取样面积为整个花瓣面积的2/3；该样品中患病花瓣面积等于正常花瓣面积；将所述样品进行清洗和消毒；3)、将病样进行病原菌的分离纯化培养：将步骤2)所得的消毒后样品用无菌剪剪去四周宽1mm的褐化组织，再以病健交界处为中心，剪成长度为0.4×0.5cm的病样放入专用培养基进行接种培养，于18±0.5℃恒温、12h光照、12h黑暗条件下培养直至长出菌丝为止；将所得的菌丝于18±0.5℃，12h光照、12h黑暗条件下进行纯化培养，直至获得纯菌种；专用培养基的制备方法为：称取麦麸200g，加入750～850mL蒸馏水，煮沸15～25min后过滤，滤液中加入葡萄糖19～21g和琼脂17～19g混合，完全溶解后，蒸馏水定容至1000mL；灭菌后冷却至40～50℃时，取1/4的体积量并加入19～21mg的利福平摇匀，得专用培养基。