[发明专利]一种制备重组人凝血八因子的方法在审
| 申请号： | 201610187699.6 | 申请日： | 2016-03-29 |
| 公开（公告）号： | CN107236036A | 公开（公告）日： | 2017-10-10 |
| 发明（设计）人： | 陈春麟;顾性初;林筱芹;王涛 | 申请（专利权）人： | 上海美迪西生物医药股份有限公司;美迪西普亚医药科技（上海）有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/755 | 分类号： | C07K14/755;C12N15/85;C12N5/10 |
| 代理公司： | 上海瀚桥专利代理事务所(普通合伙)31261 | 代理人： | 曹芳玲,郑优丽 |
| 地址： | 201299 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种制备重组人凝血八因子的方法，包括以下步骤构建表达人凝血八因子的细胞株；将构建的人凝血八因子表达细胞株接种到培养基中，振荡培养一段时间，至细胞密度达到1.5～2.5×106cells/ml，以15的传代比例细胞传代，振荡培养至细胞密度达到1.5～2.5×106cells/ml，获得种子液；将获得的种子液接种到细胞反应器的培养基中，培养一段时间，使细胞液的细胞密度达到2～6×106cells/ml；然后向细胞液中加入外源的血管性血友病因子并对细胞液进行补料培养，获得细胞原液，其中，在所述补料培养过程中，控制细胞液中血管性血友病因子活性与人凝血八因子活性比为2～121；从获得的细胞原液中分离纯化出重组人凝血八因子。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 制备 重组 凝血 因子 方法 | ||
【主权项】：
一种制备重组人凝血八因子的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）构建表达人凝血八因子的细胞株；（2）将步骤（1）构建的人凝血八因子表达细胞株接种到培养基中，振荡培养一段时间，至细胞密度达到1.5～2.5×106cells/ml，以1:5的传代比例细胞传代，振荡培养至细胞密度达到1.5～2.5×106cells/ml，获得种子液；（3）将步骤（2）获得的种子液接种到细胞反应器的培养基中，培养一段时间，使细胞液的细胞密度达到2～6×106cells/ml；然后向细胞液中加入外源的血管性血友病因子并对细胞液进行补料培养，获得细胞原液，其中，在所述补料培养过程中，控制细胞液中血管性血友病因子活性与人凝血八因子活性比为2～12:1；（4）从步骤（3）获得的细胞原液中分离纯化出重组人凝血八因子。
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