[发明专利]一种鸭坦布苏病毒病疫苗的效力检验方法

摘要

本发明提供了一种鸭坦布苏病毒病疫苗的血清学效力检验方法，该方法使用HI抗体阴性鸭，分为10只免疫组和5只对照组，免疫组各皮下或肌肉注射鸭坦布苏病毒病疫苗。其中灭活疫苗以0.5ml或1.0ml/只的剂量免疫2次，首免后2周进行二免，活疫苗以1羽份/只的剂量免疫1次。接种后3～4周，采血，分离血清，进行HI抗体效价测定。对照鸭HI抗体效价均应<15，免疫组应至少有7只鸭的血清HI抗体效价≥110，判疫苗效力检验合格。本发明提供的血清学效力检验方法操作方便，结果准确，可广泛应用于基层、疫苗研制和检验单位进行鸭坦布苏病毒病疫苗的效力评价和免疫程序的制定。

主权项

一种鸭坦布苏病毒病灭活疫苗效力检验方法，其特征在于，使用HI抗体阴性鸭，分为免疫组和对照组，免疫组各皮下或肌肉注射鸭坦布苏病灭活疫苗，首免后2周进行二免，两次免疫的剂量均为0.5ml/只～1.0ml/只，接种后3～4周，采血，分离血清，使用HI抗原进行HI抗体效价测定，对照组鸭HI抗体效价均应<1:5，免疫组应至少有70％鸭的血清HI抗体效价≥1:10，判灭活疫苗效力检验合格，其中待检血清经下述步骤处理后检测：将待检血清56～60℃灭活30分钟；取血清100μl加入400μl 25％白陶土，剧烈震荡血清/白陶土混合物，每5min震荡一次，共20±5min，然后1000g离心20min；加入100μl 10％鹅红细胞，每隔5min轻轻摇动上层清液，使红细胞保持悬浮状态，然后800g离心10min，得上清即为处理后的待检血清，其中25％白陶土的配制为：25g白陶土溶于100ml pH9.0硼酸氯化钠溶液；其中，用于HI抗体检测的试剂是鸭坦布苏病毒病HI抗原，其是利用鸭坦布苏病毒HB株经去除非特异性血凝抑制物质后纯化和灭活后得到，所述非特异血凝抑制物的去除，是将接种所述病毒乳鼠的脑组织融化后，按照W/V为1:4的比例加入终浓度为无菌8.5％的蔗糖，匀浆，在搅动状态下，将匀浆物逐滴加入丙酮溶液中，抽提2次，离心去除上清液，收集沉淀冷冻干燥，加入无菌生理盐水溶解冷冻干燥后的沉淀，5000～10000g离心30～60分钟，上清液即为不含非特异血凝抑制物的病毒液，其中所述HI抗体效价测定的方法是：测定HI抗原的HA效价，用灭菌的抗原稀释液配制4个工作单位的抗原，利用抗原专用稀释液将待测样品做连续倍比稀释后，加入4个HA单位抗原，放入湿盒中，2～8℃过夜，再加入0.33％的鹅红血球，轻轻混匀后放入湿盒中置37℃60分钟，观察凝集反应，试验设阴、阳性血清对照及红细胞对照，根据凝集抑制反应判定抗体效价。