[发明专利]一种特异性抗原发性肝癌免疫树状突细胞疫苗及其体外制备方法

摘要

本发明公开一种特异性抗原发性肝癌免疫树状突细胞疫苗及其制备方法，是从分离培养肝肿瘤细胞提取细胞膜蛋白作为个体特异性抗原，而激活自体的树状突细胞制备特异性抗肝癌疫苗；其在体外制备后，可以单独应用，即以细胞悬液经静脉回输；也可以和在体外扩增的免疫效能细胞如CIK或NK联合应用，或和抗肿瘤的传统治疗方法如手术、化疗和放疗结合应用，在临床中显示了显著的抗肿瘤效果。

主权项

一种特异性抗原发性肝癌免疫树状突细胞疫苗的制备方法，其特征在于：(1)制备肝癌特异性抗原：①取肝癌组织，清洗后剪碎，用I型胶原酶进行消化，过滤后离心收集细胞沉淀；②用添加了10％小牛血清和1％青链霉素的RPMI 1640培养液悬浮步骤①所得的细胞沉淀，培养传代细胞，收集细胞于TBS中；③用反复冻融法破碎步骤②所得的细胞；经离心和超速离心的方法获得细胞膜蛋白，并用TBS充分悬浮；(2)准备自体DC：分离外周血单核细胞，即收集粘附于培养皿的细胞，更换无血清培养液，加入400U/ml IL‑4和1000U/ml GM‑CSF培养6天，即获得非成熟的DC。(3)制备DC抗肝癌特异性疫苗：对步骤(2)所得的非成熟的DC更换无血清培养液，加入步骤(1)所得的肝癌细胞膜抗原，培养24小时后，加入1000U/ml TNF‑α、10ng/ml IL‑1β、10ng/ml IL‑6和1μM PGE2，培养48小时。