[发明专利]一种青天葵球茎组织培养快速繁殖方法

摘要

一种青天葵球茎组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤：(1)外植体的取材与消毒；(2)无菌根状茎的获取；(3)根状茎繁殖及球茎诱导一体化培养；(4)球茎移栽。该法以青天葵球茎作为外植体，通过组织培养繁殖，能够缩短培养周期并快速繁殖出青天葵优质种苗。球茎诱导系数达到13.2～15.8，移栽基质后成活率在88.3～93％，有效解决了青天葵的规模化育苗问题。

主权项

一种青天葵球茎组织培养快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)外植体的取材与消毒：青天葵球茎作为外植体进行消毒，首先将1‑2滴洗洁精滴入装有50ml自来水的烧杯中，把外植体放入烧杯轻轻搅拌5min，再用棉花清洗外植体表面污垢，自来水轻微流水冲洗8‑10min；移置超净工作台，用75v/v％乙醇浸泡30s，无菌水冲洗一遍，然后再用添加了1‑2滴吐温‑20的50ml浓度为0.1v/v％升汞消毒6‑8min、无菌水冲洗3‑5次，获得无菌外植体，其中无菌水为经高高温压灭菌的蒸馏水；(2)无菌根状茎的获取：将消毒好的外植体置于诱导培养基中进行不定芽诱导，发芽得到无菌根状茎，所述诱导培养基是以1/2MS为基本培养基，添加5g·L^‑1琼脂，30g·L^‑1蔗糖，1.5mg·L^‑1的6‑苄基腺嘌呤，0.3mg·L^‑1的吲哚乙酸，培养基pH值为5.8，培养条件为：温度为22‑24℃，光照强度1500‑2000lux，光照时间为10‑12h/d，培养时间为15‑20d；(3)根状茎繁殖及球茎诱导一体化培养：切取2‑3cm的无菌根状茎置于添加5g·L^‑1琼脂，20g·L^‑1蔗糖，1.0‑2.0mg·L^‑1的6‑苄基腺嘌呤、0.1‑0.5mg·L^‑1的激动素(KT)、0.1‑0.5mg·L^‑1的吲哚乙酸、马铃薯汁100‑200g·L^‑1的1/2MS培养基中培养获得球茎，培养基pH值为5.8，培养条件为：温度为22‑24℃，光照强度1500‑2000lux，光照时间为10‑12h/d，培养时间为30d；(4)球茎炼苗移栽：球茎进行炼苗后移植于基质中培养，再移栽至大田。