[发明专利]革兰氏阳性菌菌影的制备方法及其应用有效
| 申请号： | 201610116309.6 | 申请日： | 2016-03-01 |
| 公开（公告）号： | CN105784984B | 公开（公告）日： | 2017-12-19 |
| 发明（设计）人： | 鞠兴荣;都立辉;吴学友;袁建;何荣;陈正行 | 申请（专利权）人： | 南京财经大学 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20 |
| 代理公司： | 南京汇盛专利商标事务所(普通合伙)32238 | 代理人： | 袁静 |
| 地址： | 210023 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明提供革兰氏阳性菌菌影的制备方法及其应用，属于微生物学和免疫学领域。所述菌影的制备方法，包括在革兰氏阳性菌悬液中加入NaOH、SDS和CaCO3，在30‑40℃条件下孵育，离心，收集沉淀，洗涤后制成重悬液A；在所述重悬液A中加入H2O2，在30‑40℃条件下孵育，离心，收集沉淀，洗涤后制成重悬液B；将重悬液B在20‑30℃条件下孵育，离心，收集沉淀，洗涤，得到革兰氏阳性菌菌影。本发明利用简单化学试剂就可以快速、高效制备革兰氏阳性菌菌影，显著降低了生产成本。由于单增李斯特菌菌影保留了细菌结构的完整性,免疫后能够产生针对单增李斯特菌的抗体，从而筛选到能够高效、快速检测该细菌的抗体。 | ||
| 搜索关键词： | 革兰氏 阳性 菌菌影 制备 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
革兰氏阳性菌菌影的制备方法，其特征在于所述革兰氏阳性菌为单增李斯特菌，包括如下步骤：（1）在革兰氏阳性菌悬液中加入NaOH、SDS和CaCO3，在30‑40℃条件下孵育，离心，收集沉淀，洗涤后制成重悬液A；所述革兰氏阳性菌悬液的OD600为0.3～0.5；（2）在所述重悬液A中加入H2O2，在30‑40℃条件下孵育，离心，收集沉淀，洗涤后制成重悬液B；（3）将重悬液B在20‑30℃条件下孵育，离心，收集沉淀，洗涤，得到革兰氏阳性菌菌影；步骤（1）中革兰氏阳性菌悬液中加入的NaOH的终浓度为20‑40mmol/L，加入的SDS的终浓度为0.1‑0.3mmol/L，每升革兰氏阳性菌悬液中CaCO3的加入量为9‑11mmol；步骤（1）中，悬液孵育时在80‑120r/min条件下振摇，孵育时间为40‑60min；步骤（2）中所述重悬液A中加入的H2O2的最终质量百分浓度为0.02‑0.05%；步骤（2）中，悬液孵育时在80‑120r/min条件下振摇，孵育时间为20‑40min；步骤（3）中，所述重悬液B孵育时在30‑50r/min条件下振摇，孵育时间为20‑40min。
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