[发明专利]一种玉米赤霉烯酮免疫亲和柱及其制备方法和用途在审
| 申请号： | 201610112233.X | 申请日： | 2016-02-29 |
| 公开（公告）号： | CN105771937A | 公开（公告）日： | 2016-07-20 |
| 发明（设计）人： | 罗晓琴;冯静;万宇平;何方洋;徐念琴;朱亮亮;崔海峰;齐向武 | 申请（专利权）人： | 北京勤邦生物技术有限公司 |
| 主分类号： | B01J20/281 | 分类号： | B01J20/281;B01J20/30;B01D15/38;G01N1/34 |
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| 地址： | 102206 北京市昌平*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种提取玉米赤霉烯酮的免疫亲和柱。本发明所提供的免疫亲和柱用来提取谷物和饲料中的霉菌毒素玉米赤霉烯酮，包括玉米赤霉烯酮特异性抗体、偶联有玉米赤霉烯酮特异性抗体的CNBr active Sepharose 4B、装载亲和材料的塑料管以及保存液。本发明的玉米赤霉烯酮免疫亲和柱使用方便，具有高特异性、可快速提取谷物和饲料中残留的玉米赤霉烯酮。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 玉米 赤霉烯酮 免疫 亲和 及其 制备 方法 用途 | ||
【主权项】：
一种制备玉米赤霉烯酮免疫亲和柱的方法，该方法包括下列步骤：a)称取CNBr active Sepharose 4B柱料1g，加入1mM HCl溶液10ml，浸泡30min，使之溶胀；b)然后以3000～8000r/min转速离心2～10min分离柱料，用0.1M PH9.0CB缓冲液洗涤溶胀的基质3～5次，每次加入缓冲液10ml，以5000r/min离心10min分离柱料；c)向溶胀好的柱料中加入抗体30mg，再加入0.1M PH9.0CB缓冲液10ml，于37℃条件下150r/min震荡反应1h；d)离心分离柱料，用0.1M PH8.3NaHCO3缓冲液洗柱料3～5次，10ml/次；e)加入含0.5M NaCl的0.1M PH8.0的Tris‑HCl溶液10ml于结合有抗体的柱料中，4℃过夜或者37℃，150r/min反应2h封闭未结合位点；f)用含0.5M NaCl的0.1M PH4.0的醋酸钠洗脱液与含0.5M NaCl的0.1M PH8.0的Tris‑HCl溶液交替洗涤3～5遍，最终用含0.5M NaCl的0.1M PH8.0的Tris‑HCl洗脱液10ml复溶；g)按每支1ml抗体结合凝胶溶液进行装柱，加20％的乙醇保存液，4～8℃，可保存一年以上。
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