[发明专利]抗乙肝e抗原的红色荧光抗体的制备方法

摘要

本发明公开了一种抗乙肝e抗原的红色荧光抗体的制备方法，通过基因工程手段，将合成的甲烷马氏甲烷八叠球菌(Methanosarcina mazei)物种的氨酰-tRNA合成酶(mPylRS)的基因与质粒pBK重组，获得mPylRS-pBK；以mPylRS-pBK为模板，构建突变库lib-mPylRS-pBK；将lib-mPylRS-pBK电击转化、筛选；筛选重组NBDKRS-pBK质粒；将抗HBeAg抗体的DNA与pBAD重组，获得anti-HBeAg-4tag-pBAD；分别将质粒anti-HBeAg-4tag-pBAD和NBDKRS-pBK转化到感受态中，获得了制备抗乙肝e抗原红色荧光抗体的生物表达系统。本发明实现了抗乙肝e抗原红色荧光抗体的制备，提高了检测的灵敏度。

主权项

一种抗乙肝e抗原的红色荧光抗体的制备方法，其特征在于，所述抗乙肝e抗原的红色荧光抗体的制备方法包括如下步骤：S1：获得甲烷马氏甲烷八叠球菌mPylRS突变库lib‑mPylRS‑pBK；S2：获得NBD‑赖氨酸；S3：筛选获得NBDKRS‑pBK质粒，该NBDKRS‑pBK质粒包括能够特异识别NBD‑赖氨酸的吡咯赖氨酸氨酰‑tRNA合成酶突变体NBDKRS的基因序列；S4：合成抗乙肝e抗原抗体的DNA序列，将所述抗乙肝e抗原抗体的DNA序列与质粒pBAD重组，获得大肠杆菌表达质粒anti‑HBeAg‑4tag‑pBAD；S5：将步骤S3中的NBDKRS‑pBK质粒和步骤S4中的anti‑HBeAg‑4tag‑pBAD质粒按照第一预设比例混合，经过电击转化，导入到大肠杆菌Top10中，经抗性筛选，获得菌株A；S6：将步骤S5获得的菌株A接种培养，在培养基中添加特定的物质，对菌株A进行培养、离心、超声破碎以及柱纯化得到抗乙肝e抗原红色荧光抗体。