[发明专利]一种新生仔猪睾丸生殖干细胞的高效获取方法在审
| 申请号： | 201610088028.4 | 申请日： | 2016-02-16 |
| 公开（公告）号： | CN105647855A | 公开（公告）日： | 2016-06-08 |
| 发明（设计）人： | 白银山;张守全;朱翠;冯美莹;卫恒习;李莉 | 申请（专利权）人： | 华南农业大学 |
| 主分类号： | C12N5/076 | 分类号： | C12N5/076 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人： | 龚燮英 |
| 地址： | 510642 广东省广州市天*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种新生仔猪睾丸生殖干细胞(mGSCs)的高效获取方法，其包括以下步骤：通过两步酶法消化获取新生仔猪的睾丸组织单细胞悬液；利用差速贴壁法去除睾丸组织中成纤维类的贴壁细胞；差速贴壁5次以后，收集未贴壁细胞，所述未贴壁细胞中含有淋巴细胞、红细胞和mGSCs；利用密度梯度离心方法将淋巴细胞和红细胞与mGSCs分离，即得到高纯度的mGSCs。本发明的方法操作简单，重复性好，成功率高，高效的获取高比例的mGSCs，对于后期研究mGSCs性质及其应用具有重要作用。不仅可应用于猪mGSCs生物学性质研究的科研平台、也可以在猪mGSCs介导的动物育种、品种改良和濒危品种保存等方面具有潜在的应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 新生 仔猪 睾丸 生殖 干细胞 高效 获取 方法 | ||
【主权项】：
一种新生仔猪睾丸生殖干细胞的高效获取方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)、通过胰蛋白酶和胶原蛋白酶的两步酶消化法获得新生仔猪的睾丸组织单细胞悬液；(2)、利用差速贴壁法使睾丸组织中贴壁能力强的成纤维类的细胞贴壁而被去除；(3)、差速贴壁5次以上，收集未贴壁细胞，所述未贴壁细胞中含有淋巴细胞、红细胞和生殖干细胞；(4)、利用Percoll密度梯度离心方法将密度不同的淋巴细胞和红细胞与生殖干细胞分离，即得纯的生殖干细胞。
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