[发明专利]一种用于伏马毒素B1灵敏检测的磁控比率荧光适配体传感器的制备方法

摘要

本发明提供了一种用磁控比率荧光适配体传感器灵敏检测伏马毒素B1的方法，包括如下步骤发射绿色荧光的CdTe量子点水溶液和发射红色荧光的CdTe量子点水溶液的制备；SiO2纳米球分散液的制备；Fe3O4@SiO2磁珠分散液的制备；gQDs包覆的SiO2分散液的制备；rQDs包覆mSiO2纳米球分散液的制备；SiO2@gQDs标记的Aptamer荧光探针分散液的制备；mSiO2@rQDs标记的cDNA磁性‑荧光探针分散液的制备；传感器的构建及样品的检测；对待测样进行检测。本发明研制的磁控比率荧光适配体传感器，加工方法简便、检测成本低，可以提供内部校正以消除环境因素、激发强度变化和探针浓度等因素的干扰，大大减少误差，提高FB1检测的准确性和灵敏性。

主权项

一种用磁控比率荧光适配体传感器检测伏马毒素B1的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1、发射绿色荧光的水溶性CdTe量子点gQDs水溶液和发射红色荧光的水溶性CdTe量子点rQDs水溶液的制备；步骤2、单分散SiO2纳米球分散液的制备；步骤3、Fe3O4@SiO2磁珠mSiO2分散液的制备；步骤4、gQDs包覆的SiO2SiO2@gQDs分散液纳米球的制备：取步骤2制备的SiO2纳米球分散液和0.02M NaCl溶液溶解的聚二烯丙基二甲基氯化铵PDDA溶液于烧杯中混合均匀，磁力搅拌反应；产物经离心分离、洗涤后，再加入步骤1中制备的gQDs水溶液，于避光条件下磁力搅拌反应，经离心分离、洗涤后，避光自然干燥，将干燥后的产物分散到蒸馏水中，得到SiO2@gQDs分散液，备用；步骤5、rQDs包覆mSiO2纳米球mSiO2@rQDs分散液的制备：取用步骤3中制备的mSiO2分散液，向其中加入聚二烯丙基二甲基氯化铵溶液，机械搅拌反应；将产物磁性分离，二次水洗3次后，加入二次水将其重新分散，制得聚二烯丙基二甲基氯化铵修饰的mSiO2(简称为mSiO2‑PDDA)；最后，加入rQDs水溶液机械搅拌，经磁性分离，二次水洗后，避光自然干燥，将干燥后的mSiO2@rQDs分散在二次水中，得到mSiO2@rQDs分散液，备用；步骤6、SiO2@gQDs标记的Aptamer SiO2@gQDs‑Aptamer荧光探针分散液的制备：取步骤4制备的SiO2@gQDs分散液，加入1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐水溶液和N‑羟基丁二酰亚胺NHS水溶液，振荡反应，随后加入Aptamer储备液，振荡孵育过夜，反应完毕后，离心洗涤产物，将产物重新分散在Tris‑HCl溶液中，得到SiO2@gQDs‑Aptamer分散液，备用；步骤7、mSiO2@rQDs标记的Aptamer的互补链cDNA mSiO2@rQDs‑cDNA磁性‑荧光探针分散液的制备：取步骤5制备的mSiO2@rQDs的分散液，加入EDC水溶液和NHS水溶液，振荡反应，加入cDNA，振荡孵育过夜，反应完毕后，离心洗涤产物，将产物重新分散在Tris‑HCl溶液中，得到mSiO2@rQDs‑cDNA分散液，备用；步骤8、传感器的构建及样品的检测，包括磁控‑比率荧光‑靶向纳米生物复合物的制备：取步骤6制备的SiO2@gQDs‑Aptamer荧光探针分散液和步骤7制备的mSiO2@rQDs‑cDNA磁性‑荧光探针分散液混合，进行第一次恒温振荡孵育，制得mSiO2@rQDs‑cDNA/Aptamer‑gQDs@SiO2纳米生物复合物，对产物mSiO2@rQDs‑cDNA/Aptamer‑gQDs@SiO2纳米生物复合物磁性分离、洗涤后，重新分散在Tris‑HCl缓冲溶液A中，备用；对FB1标准品进行检测，建立标准曲线：取所制备的mSiO2@rQDs‑cDNA/Aptamer‑gQDs@SiO2纳米生物复合物与FB1溶液混合，进行第二次恒温振荡孵育；经磁性分离后，弃去已脱附的SiO2@gQDs，将收集得到的mSiO2@rQDs‑cDNA/Aptamer‑gQDs@SiO2纳米生物复合物洗涤后，重新分散在Tris‑HCl缓冲溶液B中，设置激发波长为365nm，扫描得到荧光谱图，通过荧光强度比(Ig/Ir)/(Ig/Ir)0与FB1标准品浓度之间的对应关系建立标准曲线，其中，(Ig/Ir)和(Ig/Ir)0分别为存在与不存在FB1时，磁性收集的mSiO2@rQDs‑cDNA/Aptamer‑gQDs@SiO2纳米生物复合物所测得的gQDs荧光强度和rQDs荧光强度的比值；步骤9、对待测样品按照步骤8同样的方法进行检测，依据步骤8得到的标准曲线得出检测数据。