[发明专利]一种基于双分子荧光互补技术的筛选互作蛋白的方法

摘要

本发明公开了一种基于双分子荧光互补技术的筛选互作蛋白的方法。该方法包括：1)将YGFP分成N端(序列1第1‑157位)和C端(序列1第158‑238位)；在N端编码基因3’末端通过连接序列(编码序列2所示连接肽)连接目的蛋白A的编码基因，形成融合基因片段A；在C端编码基因5’或3’末端通过所述连接序列连接目的蛋白B的编码基因，形成融合基因片段B；2)将融合基因片段A和B导入受体酵母细胞，培养所得转基因酵母细胞，检测其是否产生绿色荧光，若产生绿色荧光，则目的蛋白A与B互作或候选互作；若不产生绿色荧光，则目的蛋白A与B不互作或候选不互作。本发明建立的BiFC技术具有较高的敏感性和特异性，适合于在酵母中开展高通量蛋白质相互作用筛选。

主权项

1.一种检测目的蛋白A与目的蛋白B是否为互作蛋白的方法，包括如下步骤：（1）将绿色荧光蛋白分成N端部分和C端部分；在所述N端部分的编码基因的3’末端通过连接序列连接目的蛋白A的编码基因，形成融合基因片段A；在所述C端部分的编码基因的5’末端或3’末端通过所述连接序列连接目的蛋白B的编码基因，形成融合基因片段B；所述绿色荧光蛋白的氨基酸序列如序列表中序列1所示；所述N端部分的氨基酸序列如序列表中序列1的第1‑157位所示；所述C端部分的氨基酸序列如序列表中序列1的第158‑238位所示；所述连接序列编码序列表中序列2所示连接肽；（2）将所述融合基因片段A和所述融合基因片段B导入同一受体酵母细胞，得到转基因酵母细胞；培养所述转基因酵母细胞，然后检测所述转基因酵母细胞是否产生绿色荧光，根据检测结果按照如下确定所述目的蛋白A与所述目的蛋白B是否互作：若所述转基因酵母细胞产生绿色荧光，则所述目的蛋白A与所述目的蛋白B为或候选为互作蛋白；若所述转基因酵母细胞不产生绿色荧光，则所述目的蛋白A与所述目的蛋白B不为或候选不为互作蛋白。