[发明专利]定向驯化选育高产吡咯喹啉醌的甲基营养菌

摘要

本发明公开了定向驯化选育高产吡咯喹啉醌的甲基营养菌。本发明提供了一种定向驯化选育高产吡咯喹啉醌的甲基营养菌突变株的方法，包括如下步骤:1)将初始甲基营养菌作为处理对象在含有甲醇的液体培养基中进行多次诱导培养，得到驯化后菌，所有驯化后菌组成驯化菌株库；2)发酵所述驯化菌株库中的驯化后菌，收集所有驯化后菌发酵液；3)检测所述所有驯化后菌发酵液中吡咯喹啉醌，选取发酵液中吡咯喹啉醌产量高于所述初始甲基营养菌的发酵液中吡咯喹啉醌的单菌株，为高产吡咯喹啉醌的甲基营养菌突变株。本发明通过逐步提高培养基中的甲醇浓度对甲基营养菌进行应激驯化，提高了选育正突变率以及吡咯喹啉醌产量增加幅度。

主权项

1.一种定向驯化选育高产吡咯喹啉醌的甲基营养菌突变株的方法，包括如下步骤:1）种子培养液出发菌株为脱氮生丝微菌（Hyphomicrobium denitrificans）FJNU‑R8，保藏编号为CGMCCNo.10620，从所述菌株的保种斜面通过画线分离单菌落，然后将单菌落接入种子培养基，培养得到种子培养液；2）应激定向驯化诱导培养将种子培养液进行9次诱导培养，具体如下：将种子培养液按体积百分含量为5%接种量转入含甲醇2%的液体培养基中，诱导培养至OD₆₀₀比培养前增加1.5，得到1次诱导培养液；1次诱导培养液离心，收集菌体，转接到含3%甲醇的液体培养基中，诱导培养至OD₆₀₀比培养前增加1.5，得到2次诱导培养液；依次类推，再进行7轮定向驯化，每轮诱导培养至OD₆₀₀值比该轮培养前增加1.5，且每轮液体培养基中甲醇浓度比上一轮提高1%，直至培养基中甲醇的浓度达到10%；得到驯化后的菌液；将驯化后的菌液稀释，取稀释菌液涂于含有10%甲醇的平板培养基，培养得到由驯化菌株组成的驯化菌株库；所述液体培养基中甲醇浓度为体积百分比浓度；3）分别发酵所述驯化菌株库中的驯化后菌，收集所有驯化后菌发酵液；4）分别检测所述所有驯化后菌发酵液中吡咯喹啉醌，选取发酵液中吡咯喹啉醌产量高于所述初始甲基营养菌的发酵液中吡咯喹啉醌的单菌株，为高产吡咯喹啉醌的甲基营养菌突变株。