[发明专利]分子印记纳米磁珠分散固相萃取与质谱联用用于大鼠血浆中虎杖代谢物质群的检测方法

摘要

本发明公开了一种基于分子印记纳米磁珠分散固相萃取与LC/Q‑TOF‑MS技术联用用于大鼠血浆中虎杖代谢物质群的检测方法，步骤如下1.制备印记磁珠，将制备好的印记磁珠加入到处理好的大鼠血浆中进行吸附，解析，收集解析液。将上述解析液氮气吹干，用流动相和参考物染料木素复溶，利用LC/Q‑TOF‑MS对解析液进行半定量分析，鉴定中药虎杖的代谢物质群。采用本发明方法可以针对生物样品基质复杂的作用特点，通过富集代谢物质群，结合活性筛选，追溯中药原形成分，揭示中药虎杖“原形成分‑代谢物质群‑活性”的相关性，鉴定得到的目标代谢产物数量多，富集效果好。

主权项

一种基于分子印记纳米磁珠分散固相萃取与LC/Q‑TOF‑MS技术联用用于大鼠血浆中虎杖代谢物质群的检测方法，其特征在于该方法包括以下步骤：(1)制备印记磁珠：将Fe3O4@SiO2纳米粒分散于甲苯中，加入硅烷偶联剂，氮气条件下加热回流12～48h，经磁性分离后，洗涤，真空干燥；氮气保护下，以甲醇为溶剂，依次与丙烯酸甲酯和乙二胺各反应1次，每次反应24～36h，得到纳米磁珠Fe3O4@EDA；将Fe3O4@EDA分散于甲醇溶液，加入三羟甲基丙烷三丙烯酸酯，氮气条件下加热回流6～36h，经磁性分离后，洗涤，真空干燥，得Fe3O4@TMPTA；将模板分子虎杖苷、大黄素‑8‑O‑β‑D‑葡萄糖苷分别和Fe3O4@TMPTA置于致孔剂中室温下预聚1‑2h，再加入甲基丙烯酸室温预聚0.5～2h，最后加入交联剂及引发剂，氮气保护下，依次在50℃下聚合6‑24h后，60℃下聚合12‑24h；所得聚合物分别用体积比为1:5‑9的醋酸甲醇混合溶液洗脱模板分子，干燥，得到虎杖苷、大黄素‑8‑O‑β‑D‑葡萄糖苷分子印记磁珠，分别记为PD‑MMIPs、EG‑MMIPs；(2)样品处理：按照给药量为4.0g/kg大鼠给药中药虎杖浸膏后，分别于给药后0分钟，5分钟，10分钟，30分钟，60分钟，90分钟，120分钟，180分钟取血样，将血样分别放于含有抗凝剂的小管中，离心后取上清液得血浆，将每份样品取出相同的量制成混合血浆；随后混合血浆处理如下：取两份混合血浆，分别加入其3倍体积的甲醇，经涡旋、离心，分别取上清液氮气吹干，溶剂复溶，再分别加入PD‑MMIPs和EG‑MMIPs印记磁珠振摇，磁性分离，弃去上清液，甲醇洗去残留溶液后，加入解析溶液超声30分钟解析模板分子；(3)样品分析：分别将上述得到的解析液氮气吹干，复溶，利用LC/Q‑TOF‑MS对解析液进行半定量分析，鉴定中药虎杖的代谢物质群。