[发明专利]一种基于Luminol/Au@branchedPPy的电致化学发光免疫传感器的制备方法及应用

摘要

本发明涉及一种基于Luminol/Au@branched PPy的电致化学发光免疫传感器的制备方法及应用，属于电化学发光传感器领域。具体是采用纳米复合材料Au@branched PPy，以Luminol为电化学发光信号源，制备一种检测肿瘤标志物的电致化学发光免疫传感器，采用单阶循环脉冲法实现对不同浓度的待测物的电化学发光强度的检测。

主权项

一种基于Luminol/Au@branched PPy的电致化学发光免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）Au@branched PPy的制备将0.1 ~ 0.3 mol吡咯单体分散于40 ~ 60 mL、体积比为1:1的水和乙醇混合液中，加入0.05 ~ 0.15 mol/L的FeCl3溶液，搅拌24 h，过滤，用体积比为1:1的水和乙醇混合液洗涤3次，将其置于60 ºC真空干燥箱中干燥48 h，制得黑色固体branched PPy；将10 ~ 30 mg branched PPy分散到10 mL超纯水中，加入5 ~ 15 mL金溶胶，将得到的混合溶液在室温下振荡24 h，6000 r/min下离心10 ~ 15 min，洗涤3次，将产物Au@branched PPy重新分散到10 mL超纯水中，制得Au@branched PPy溶液；（2）Luminol/Au@branched PPy的制备将1 mL、浓度为1 ~ 3 mg/mL的Au@branched PPy溶液与1 mL、浓度为0.5 ~ 1.5 mmol/L的Luminol溶液混合，将得到的混合溶液在室温下振荡24 h，6000 r/min下离心洗涤3次，将产物Luminol/Au@branched PPy重新分散于1 mL超纯水中，制得基底材料Luminol/Au@branched PPy溶液；（3）抗体捕获基底材料Luminol‑Au@branched PPy‑Ab溶液的制备在1 mL、浓度为1 ~ 3 mg/mL的基底材料Luminol‑Au@branched PPy溶液中，加入200 ~ 400 μL、浓度为5 ~ 15 μg/mL的待测抗体Ab溶液，4 ºC下振荡孵化48 h，6000 r/min下离心洗涤5 ~ 15 min，将产物Luminol‑Au@branched PPy‑Ab分散到1 mL、浓度为40 ~ 60 mg/mL的[BPy]BF4离子溶液中，制得抗体捕获基底材料Luminol‑Au@branched PPy‑Ab溶液；（4）基于Luminol/Au@branched PPy的电致化学发光免疫传感器的制备依次用1.0、0.3、0.05 µm的氧化铝粉末对直径为4 mm的玻碳电极进行抛光，用超纯水中清洗干净，氮气吹干；在电极表面滴加6 μL、浓度为1 ~ 3 mg/mL的抗体捕获基底材料Luminol‑Au@branched PPy‑Ab溶液，4 ºC保存；用3 μL、质量分数为0.5 ~ 1.5%的牛血清白蛋白溶液封闭非特异性活性位点，于4 ºC冰箱中孵化1 ~ 3 h，清洗干净；将6 μL、浓度为0.01 pg/mL ~ 10 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物滴涂至电极表面，室温下孵化1 ~ 3 h，清洗干净，于4 ºC冰箱中储存备用，制得基于Luminol/Au@branched PPy的电致化学发光免疫传感器。