[发明专利]使用RNA引导的内切核酸酶在非常规酵母中基因靶向有效

专利信息
申请号: 201580056204.X 申请日: 2015-07-21
公开(公告)号: CN107002020B 公开(公告)日: 2021-12-21
发明(设计)人: R.弗里施;X.范;S-P.洪 申请(专利权)人: 纳幕尔杜邦公司
主分类号: C12N1/19 分类号: C12N1/19;C12N15/10;C12N15/55;C12N15/113;C12N15/90
代理公司: 中国专利代理(香港)有限公司 72001 代理人: 唐华东;黄希贵
地址: 美国特*** 国省代码: 暂无信息
权利要求书: 查看更多 说明书: 查看更多
摘要: 本文公开了非常规酵母,其包含至少一种RNA引导的内切核酸酶(RGEN),所述RNA引导的内切核酸酶包含至少一种不具有5’端的RNA组分。该未封端的RNA组分包含与酵母中的染色体或附加体中的靶位点序列互补的序列。RGEN可结合到,并任选地切割靶位点序列处的一个或两个DNA链。本文的RGEN的示例是Cas9蛋白质与向导RNA的复合物。在某些实施方案中使用核酶以提供缺乏5’端的RNA组分。本文还公开了在非常规酵母中基因靶向的方法。
搜索关键词: 使用 rna 引导 核酸酶 常规 酵母 基因 靶向
【主权项】:
一种非常规酵母,其包含至少一种RNA引导的内切核酸酶(RGEN),所述RNA引导的内切核酸酶包含至少一种不具有5’‑端的RNA组分,其中所述RNA组分包含与所述酵母中的染色体或附加体上的靶位点序列互补的序列,其中所述RGEN能够结合到所述靶位点序列。
下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。

该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于纳幕尔杜邦公司,未经纳幕尔杜邦公司许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服

本文链接:http://www.vipzhuanli.com/patent/201580056204.X/,转载请声明来源钻瓜专利网。

同类专利
  • 一种用于改善清酒风味的重组清酒酵母及其在清酒酿造中的应用-202310184602.6
  • 吴石金;徐浩;朱廷恒 - 浙江工业大学
  • 2023-03-01 - 2023-10-27 - C12N1/19
  • 本发明公开了一种用于改善清酒风味的重组清酒酵母及其在清酒酿造中的应用,所述重组清酒酵母是利用CRISPR/Cas9双质粒系统,将柠檬烯合酶ClLs编码基因、橙花基二磷酸合酶CPT1编码基因和法尼基焦磷酸合成酶突变体编码基因转入酿酒酵母基因组获得的;本发明以CRISPR/Cas9双质粒系统为基础,将Cas9基因整合染色体的思路在保证基因编辑效率的同时简化了工业酿酒酵母菌株基因改造的操作流程,并可以实现整合至基因组Cas9的无痕敲除。本发明的重组清酒酵母菌株从基因层面对菌株进行风味改良,构建了柠檬烯的合成途径,柠檬烯与清酒的其他风味物质共同作用,对清酒风味起到了有益作用。
  • 一种利用木质纤维素水解液生产丁二酸的高耐受酵母工程菌株及其应用-202310891526.2
  • 祁庆生;卢雪梅;崔志勇;谷金红 - 山东大学
  • 2023-07-19 - 2023-10-27 - C12N1/19
  • 本发明属于微生物及发酵工程技术领域,具体涉及一种利用木质纤维素水解液生产丁二酸的高耐受酵母工程菌株及其应用。本发明是在酵母细胞中将谷胱甘肽合成酶超表达,有助于提高其糠醛耐受能力。经试验证明,所述菌株能够利用含有糠醛等抑制物的木质纤维素水解液。经发酵培养后,丁二酸产量达到37.4g/L,转化率达到0.78g/g葡萄糖/木糖。同时上述工程菌在培养过程中可以进行低pH发酵,从而减少工业生产过程中对培养液pH进行调节的步骤,进一步节约成本,从而表明其在在食品、化工及可降解材料等诸多领域具有良好的实际应用价值和前景。
  • 一种低乙醇合成量、高乙酰辅酶A合成量的酿酒酵母及其应用-202310891969.1
  • 刘龙;陈坚;吕雪芹;堵国成;李江华;刘延峰;张晨阳 - 江南大学
  • 2023-07-20 - 2023-10-27 - C12N1/19
  • 本发明公开了一种低乙醇合成量、高乙酰辅酶A合成量的酿酒酵母及其应用,属于生物技术领域。本发明为降低酿酒酵母中主要的副产物乙醇的积累量,同时增加乙酰辅酶A的合成量,对MTH1、MED2和HXT2转录因子进行改造,筛选得到降低乙醇合成量的最优转录因子组合,再对整合在酿酒酵母基因组上的不同合成途径的异源的乙酰辅酶A合成途径进行比较,提供了一种重组酿酒酵母菌株。该菌株可实现以葡萄糖为碳源的无菌培养基中生长,为代谢工程改造酿酒酵母合成高价值化合物搭建了平台,且构建方法简单,便于使用,具有很好地应用前景。
  • 一种产西柏三烯一醇的酿酒酵母及应用-202110621208.5
  • 杨海泉;陈献忠;张坤杰;刘万隆;董田田;沈微;夏媛媛;陈磊;曹钰 - 江南大学
  • 2021-06-03 - 2023-10-27 - C12N1/19
  • 本发明公开了一种产西柏三烯一醇的酿酒酵母及应用,属于代谢工程和微生物工程领域。本发明通过将关键酶西柏三烯醇合成酶基因、香叶基香叶基焦磷酸(GGPP)合酶基因、法尼基焦磷酸合成酶(ERG20)基因整合至酿酒酵母菌株基因组上,并利用启动子Phxt1替换角鲨烯合成酶(ERG9)原来的启动子来敲低竞争途径麦角固醇途径,还将含有关键酶基因ggpp基因和cbts基因的游离质粒转入该酿酒酵母中,进一步提高了西柏三烯一醇产量。本发明还采用线粒体区室化方法,将GGPP合酶和西柏三烯醇合成酶定位到线粒体中,使西柏三烯一醇产量提高至283.98μg/L,在5L发酵罐发酵水平,西柏三烯一醇产量可达15mg/L。
  • 合成阿福豆素和儿茶素的酿酒酵母菌株及其应用-202111106294.2
  • 周景文;孙程程;徐沙;曾伟主;余世琴;陈坚 - 江南大学
  • 2021-09-22 - 2023-10-27 - C12N1/19
  • 本发明公开了合成阿福豆素和儿茶素的酿酒酵母菌株及其应用,属于基因工程技术领域。将F3H,F3’H和CPR整合至酿酒酵母基因组,得到了阿福豆素和儿茶素前体的从头合成菌株,筛选了最好催化活性的FaDFR和的VvLAR,通过连接肽的使用极大地促进了向阿福豆素和儿茶素的代谢通量,利用GAL7p和ERG1p启动子启动基因的表达,最后在阿福豆素从头合成菌株AF12中过表达TYR1,在儿茶素从头合成菌株AF13中过表达TYR1、ARO8和ZWF1,在摇瓶水平上产量分别为64 mg/l、41 mg/L,经过5 L发酵罐的优化,最终可使阿福豆素与儿茶素的产量分别达到500.5 mg/L、321.3 mg/L。
  • 一种产γ-亚麻酸的基因工程菌株、其构建方法及其应用-202210402994.4
  • 汪庆卓;刘云起;杜菲 - 南京师范大学
  • 2022-04-18 - 2023-10-27 - C12N1/19
  • 本发明公开了一种产γ‑亚麻酸的基因工程菌株、其构建方法及其应用,属于生物工程技术领域。本发明以解脂耶氏酵母Yarrowia lipolytica为出发菌株,表达Δ6去饱和酶基因同时过表达β‑氧化途径的PEX4基因和PEX5基因;本发明构建的工程菌株可在以废弃食用油为唯一碳源的培养基上合成γ‑亚麻酸。本发明的工程菌稳定性好、胞内油脂γ‑亚麻酸含量高,合成途径不受季节限制、产量稳定、发酵底物成本低廉,并且可资源化利用废弃食用油。本发明适用于构建产γ‑亚麻酸的基因工程菌株,构建的工程菌株进一步应用于生产γ‑亚麻酸。
  • 一种胞外转运视黄醛和视黄醇的酿酒酵母菌株构建及其应用-202210313654.4
  • 刘龙;石训;陈坚;吕雪芹;石聚领;堵国成;李江华;刘延峰;刘家恒;金柯 - 江南大学
  • 2022-03-28 - 2023-10-27 - C12N1/19
  • 本发明公开了一种胞外转运视黄醛和视黄醇的酿酒酵母菌株构建及其应用,属于发酵工程技术领域。本发明构建了一株强化视黄醛和视黄醇分泌能力的重组酿酒酵母菌株,所述重组酿酒酵母强化表达了3‑羟基‑3‑甲基戊二酰辅酶A还原酶、异戊烯基焦磷酸异构酶、法尼基焦磷酸合酶、内质网大小调节因子INO2和ABC转运蛋白Pdr10;异源表达香叶基香叶基二磷酸合酶、八氢番茄红素脱氢酶、15‑顺式八氢番茄红素合酶、双功能番茄红素环化酶/八氢番茄红素合酶、15、15’‑加双氧酶;敲除酿酒酵母中的ROX1和GAL80基因;并且下调角鲨烯合酶ERG9的表达;对其进行摇瓶发酵时,该菌株胞外视黄醛、视黄醇含量分别达到43.50mg/L和16.84mg/L,视黄醛和视黄醇总含量为73.40mg/L,因此具有广阔的应用前景。
  • 基于乙醇代谢流调控提升酿酒酵母生产L-乳酸的方法-202310259539.8
  • 吕雪芹;刘龙;陈坚;堵国成;李江华;刘延峰;刘甜甜 - 江南大学
  • 2023-03-17 - 2023-10-27 - C12N1/19
  • 本发明公开了基于乙醇代谢流调控提升酿酒酵母生产L‑乳酸的方法,属于微生物技术领域。本发明以耐酸酿酒酵母TJG16作为生产菌株,在发酵有机酸过程具有酿酒酵母的耐酸性,大幅度提升了L‑乳酸的产量。对酿酒酵母TJG16做了改进,引入了枯草芽孢杆菌来源的乙醇脱氢酶基因adhA促使乙醇转化成乙醛,及引入布鲁氏菌来源的乳酸醛缩酶基因BAL促使乙醛合成乳酸。并敲除乙醛脱氢酶基因ALD6阻止乙醛合成乙酸,敲除调控半乳糖的转录调节因子编码基因GAL80并整合乳酸脱氢酶LDH,最终实现L‑LA的提升,产量从最初的47.7g/L提升到50.5~192.3g/L。本发明提供的重组酿酒酵母进一步提升L‑乳酸的生产性能,有利于提高生产效率的同时降低生产成本。
  • 一种用于生产麦角硫因的毕赤酵母菌株及其构建方法和应用-202310291125.3
  • 张目;黄晓东;胡晓清 - 广州悦荟化妆品有限公司
  • 2023-03-23 - 2023-10-27 - C12N1/19
  • 本发明涉及麦角硫因合成技术领域,具体公开了一种用于生产麦角硫因的毕赤酵母菌株及其构建方法和应用。所述毕赤酵母菌株同时过表达egt1基因、egt2基因和XP_002490234基因。本发明首次在毕赤酵母中表达麦角硫因合成途径基因egt1和egt2,并同时过表达XP_002490234基因,实现麦角硫因的高效合成,并且毕赤酵母菌株可以高密度培养,调节氧化/过氧化状态,解决了毕赤酵母细胞氧化损伤削弱麦角硫因产量的问题。本发明在毕赤酵母GS115基础上转化egt1基因、egt2基因,同时过表达XP_002490234.1基因后,毕赤酵母菌株的麦角硫因产率达782mg/L,具备工业生产前景。
  • 一种高产油脂的基因工程菌、制备方法及应用-202210358255.X
  • 康静;刘玉青;李卫东;赵昂;殷文涛;邱賽涛 - 新乡医学院
  • 2022-04-07 - 2023-10-24 - C12N1/19
  • 本发明涉及生物工程技术领域,具体涉及一种高产油脂的基因工程菌、制备方法及应用。本发明提供了一种高产油脂的基因工程菌Saccharomyces cerevisiae KJ‑pYES2‑CT‑JM‑FAS,所述Saccharomyces cerevisiae KJ‑pYES2‑CT‑JM‑FAS发酵产油脂含量高达9g/L,高于原有的圆红冬孢酵母、酿酒酵母和现有的其他生产油脂的基因工程菌的产油量为工业使用产油酵母工程菌生产生物柴油提供了新思路,具有广泛的应用价值。
  • 一种生产脂肪酸酯的工程菌的构建方法和应用-202210350960.5
  • 史硕博;王志辉;张扬;彭杰 - 北京化工大学
  • 2022-04-02 - 2023-10-24 - C12N1/19
  • 本发明涉及基因工程技术领域,具体涉及一种生产脂肪酸酯的工程菌和制备方法,包括至少一个编码来自拜氏不动杆菌(Acinetobacter baylyiADP1)的蜡酯合成酶AbWS的外源基因;所述工程菌采用的底盘细胞为圆红冬孢酵母;本发明改造后的圆红冬孢酵母可生产较大量的脂肪酸酯(如脂肪酸乙酯、脂肪酸正丁酯、脂肪酸异丁酯),大大提高了脂肪酸酯的生产能力。
  • 一种高效生产广藿香醇的工程菌及其构建方法和应用-202110799174.9
  • 黄和;彭倩倩;沈琦;杨彩玲;施天穹 - 南京师范大学
  • 2021-07-14 - 2023-10-24 - C12N1/19
  • 本发明公开了一种高效生产广藿香醇的工程菌及其构建方法和应用,所述工程菌以解脂耶氏酵母菌为出发菌株,在解脂耶氏酵母菌的基因组中插入优化的广藿香醇合酶编码基因PS1和tHMGR编码基因后得到;所述优化的广藿香醇合酶编码基因PS1如SEQ ID NO.1所示;所述tHMGR编码基因如SEQ ID NO.2所示。本发明的工程菌能够高效合成广藿香醇,构建方法高效,操作简单,此外本发明提供的收集产物的方法采用边发酵边萃取的方法,及时的将生产的广藿香醇萃取至有机相中,缓解了胞内溶解广藿香醇的压力,有效提高广藿香醇的产量,为人工细胞合成广藿香醇奠定了基础。
  • 一种产玉米黄质的解脂耶氏酵母基因工程菌及其构建方法和应用-202110534354.4
  • 花强;韦柳静;马雨悦;陈骏 - 华东理工大学;浙江赫凯生物科技有限公司
  • 2021-05-17 - 2023-10-20 - C12N1/19
  • 本发明提供了一种产玉米黄质的解脂耶氏酵母基因工程菌的构建方法,其是将2个拷贝的优化的crtZ基因依次导入解脂耶氏酵母基因工程菌XK17中,获得解脂耶氏酵母基因工程菌MY1;再将HMG基因导入工程菌MY1,得到解脂耶氏酵母基因工程菌MY3;接着,将优化的HMG基因和优化的AtoB基因,整合到解脂耶氏酵母基因工程菌MY3中,得到解脂耶氏酵母基因工程菌HA,所述优化的crtZ基因、优化的HMG基因和优化的AtoB基因的核苷酸序列分别如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示。采用该方法构建获得的解脂耶氏酵母基因工程菌HA可以提高玉米黄质的产量具有良好的应用前景。
  • 一种耐油酿酒酵母基因工程菌及其构建方法-202111325265.5
  • 柳志强;曹丽莎;沈逸;柯霞;郑裕国 - 浙江工业大学
  • 2021-11-10 - 2023-10-20 - C12N1/19
  • 一种耐油酿酒酵母基因工程菌及其构建方法,属于生物工程技术领域。本发明公开了一株过表达Are2和Yft2基因的同时替换SEI1及Tgl1基因的酿酒酵母基因工程菌,所述酿酒酵母由原始酿酒酵母利用同源重组技术替换基因后改造而成。由于原始菌株BY4741自身存储甾醇类物质的量有限,并且过量积累的脂质中间体会产生产物抑制作用,不仅直接影响目标产物的合成,而且会引发细胞毒性,降低细胞活力。改造后的耐油酿酒酵母基因工程菌较原始出发菌株显著提升了细胞油脂存储单元脂滴结构的体积占比,有效地降低了脂质累积引起的细胞毒性和产物抑制,显著提升了酯类化合物的胞内累积量,为突破酯类类化合物酿酒酵母从头合成极限提供了新的策略以及良好的耐受细胞模型。
  • 一种利用对香豆酸合成白藜芦醇工程菌、构建及应用-202310691519.8
  • 吴元庆;杨志彬;冯斌;李迪;胡江林 - 河北维达康生物科技有限公司
  • 2023-06-12 - 2023-10-13 - C12N1/19
  • 本发明公开了一种利用对香豆酸合成白藜芦醇工程菌、构建及应用,属于生物技术领域。本发明通过表达4‑香豆酰辅酶A连接酶突变体的编码基因和/或白藜芦醇合酶突变体的编码基因以及乙酰辅酶A羧化酶的编码基因和/或乙酰辅酶A合成酶的编码基因,在分别显著提高4‑香豆酰辅酶A连接酶、白藜芦醇合酶的催化活力的基础上,通过乙酰辅酶A、丙二酰辅酶A的增强表达,获得的解脂耶氏酵母工程菌能高效利用对香豆酸生产白藜芦醇,摇瓶发酵产量达到2.4g/L,5L发酵罐中分批补料发酵底物转化率达到96.3%,白藜芦醇产量达到47.8g/L。
  • 一种高效分泌表达牛乳铁蛋白抑菌肽的毕赤酵母及其构建和应用-202311053622.6
  • 吕雪芹;刘龙;陈坚;堵国成;李江华;刘延峰;张予婷 - 江南大学
  • 2023-08-21 - 2023-10-13 - C12N1/19
  • 本发明公开了一种高效分泌表达牛乳铁蛋白抑菌肽的毕赤酵母及其构建和应用,属于生物技术领域。本发明通过新型杂合信号肽构建了能够高效表达牛源乳铁蛋白抑菌肽的重组毕赤酵母菌株X‑33‑UTH1‑α‑LFcinB,摇瓶发酵产量为26.5mg/L;其次融合阴离子氧化肽以中和抑菌肽所带电荷,降低表达抑菌肽对菌株生长的影响,得到能更好表达LFcinB的重组菌株PEP1/2‑LFcinB,对其进行发酵测得产量高达54.0mg/L。本发明的毕赤酵母工程菌不仅解决了牛乳铁蛋白抑菌肽在微生物细胞中异源表达较为困难的问题,还实现了目前LFcinB产量的最高水平,具有重大工业应用潜力。
  • 一种提高毕赤酵母外源蛋白产量的方法-202210140119.3
  • 喻晓蔚;徐岩;林乃馨 - 江南大学
  • 2022-02-16 - 2023-10-03 - C12N1/19
  • 本发明公开了一种提高毕赤酵母外源蛋白产量的方法,属于生物工程技术领域。本发明通过过量表达热胁迫应答相关基因HSP78和SSA3,促进热胁迫应答机制的激活帮助胞内蛋白正确折叠,进而提升了毕赤酵母外源蛋白的产量。过量表达HSP78和SSA3后菌株的绿色荧光蛋白、脂肪酶和磷脂酶的表达量都有不同程度的提升,其中绿色荧光蛋白表达量最高提升50%,脂肪酶表达量最高提升57%,磷脂酶表达量最高提升81%,表明热激蛋白HSP78和SSA3在毕赤酵母表达外源蛋白、并提升外源蛋白的产量中具有更好的应用价值。
  • 一种原人参二醇酵母细胞工厂的构建方法及其应用-202211048608.2
  • 李检秀;谢能中 - 广西科学院
  • 2022-08-29 - 2023-09-29 - C12N1/19
  • 本发明公开一种原人参二醇酵母细胞工厂的构建方法及其应用,以酿酒酵母BY4742为出发菌株,通过同源重组的方式,将不同物种来源的3‑羟基‑3‑甲基戊二酰辅酶A还原酶、法尼基焦磷酸合成酶、角鲨烯合酶、角鲨烯环氧酶、达玛烯二醇合酶、原人参二醇合酶以及提供还原力NADPH的辅酶,整合到BY4742染色体多拷贝位点区,构建得到原人参二醇底盘细胞,然后经过多途径代谢网络优化,促进内质网膜扩增,削弱竞争性代谢途径法尼醇和羊毛甾醇的代谢流。基于上述组合策略构建得到的PPD细胞工厂,摇瓶批次发酵产量达到563.60±1.65mg/L,以葡萄糖、木薯淀粉水解液、甘蔗汁、甘蔗糖蜜为碳源进行5L发酵罐补料发酵,PPD产量最高为23.92±0.96 g/L。
  • 产β-胡萝卜素的重组解脂耶氏酵母及其构建方法和应用-202210480414.3
  • 章文明;姜岷;景艺文;信丰学;王靖楠;蒋羽佳;姜万奎 - 南京工业大学
  • 2022-05-05 - 2023-09-26 - C12N1/19
  • 本发明提供产β‑胡萝卜素的重组解脂耶氏酵母及其构建方法和应用,向解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)中导入香叶基香叶基二磷酸合酶CrtE、八氢番茄红素合成酶/番茄红素环化酶CrtYB、八氢番茄红素去饱和酶CrtI、3‑羟基‑3‑甲基戊二酰CoA还原酶tHMGR以及乙酰辅酶A羧化酶ACC的表达盒得到所述重组解脂耶氏酵母菌株。本发明重组解脂耶氏酵母的构建方法,操作简单、高效,能够高效合成β‑胡萝卜素。本发明对高价值萜类产物的工业化以及商业化应用具有重大的现实意义和经济价值。
  • 一种改造酿酒酵母菌以葡萄糖为底物合成活性VD3的方法-202310742722.3
  • 吕雪芹;刘龙;陈坚;堵国成;李江华;刘延峰;修翔 - 江南大学
  • 2023-06-21 - 2023-09-22 - C12N1/19
  • 本发明公开了一种改造酿酒酵母菌以葡萄糖为底物合成活性VD3的方法,属于生物技术领域。本发明通过导入DHCR24,强化ERG1,ERG11,tHMG1,ERG7,ERG2,敲除ERG6基因,并通过导入不同的羟化酶确定最合适的维生素D3羟化酶,发现在酵母中VDH无需提供额外的电子传递链便可以发挥作用,将合成的VD3转化为25‑OH‑VD3,并且合成25‑OH‑VD3的量是suaC的5倍。在以葡萄糖为底物的发酵生产中,最终合成5.02mg/L的活性体25‑OH‑VD3,解决了现有技术中仅能以VD3作为底物转化活性体25‑OH‑VD3的问题。
专利分类
×

专利文献下载

说明:

1、专利原文基于中国国家知识产权局专利说明书;

2、支持发明专利 、实用新型专利、外观设计专利(升级中);

3、专利数据每周两次同步更新,支持Adobe PDF格式;

4、内容包括专利技术的结构示意图流程工艺图技术构造图

5、已全新升级为极速版,下载速度显著提升!欢迎使用!

请您登陆后,进行下载,点击【登陆】 【注册】

关于我们 寻求报道 投稿须知 广告合作 版权声明 网站地图 友情链接 企业标识 联系我们

钻瓜专利网在线咨询

400-8765-105周一至周五 9:00-18:00

咨询在线客服咨询在线客服
tel code back_top