[发明专利]一种基于氢核磁共振鉴别洋槐蜜和油菜蜜的方法

摘要

本发明公开了一种基于氢核磁共振鉴别洋槐蜜和油菜蜜的方法。该方法涉及食品检测，是氢核磁共振指纹图谱在食品检测的应用。该方法首先分别建立油菜蜜的氢核磁共振数据库和洋槐蜂的氢核磁共振蜜数据库，然后利用因子分析法结合判别分析法构建鉴别模型，再对待测蜂蜜样品的进行鉴别，确定待鉴别的蜂蜜属于油菜蜜或者洋槐蜜。优点是：技术可靠，操作简单，可在短时间内处理大量样品，快速鉴别出蜂蜜种类，避免了主观因素、人为误差，结论科学可靠。

主权项

一种基于氢核磁共振鉴别洋槐蜜和油菜蜜的方法，其特征在于，该方法包含下列步骤：a建立洋槐蜜的氢核磁共振数据库(a1)收集N个油菜蜜样品，N不少于60；(a2)在N个洋槐蜜样品中取一个洋槐蜜样品一份；(a3)将样品置于离心管中，在60℃水浴至蜂蜜完全溶解，再加入样品体积8～15倍的磷酸盐缓冲溶液，涡旋振荡至均匀混合，离心，取上清液；(a4)将步骤(a3)中的上清液转移到核磁共振管中，在500MHz液体核磁共振谱仪上进行氢核磁共振¹H NMR测试，实验温度为298K，用D₂O进行锁场，采用noesypr1d脉冲序列，90°脉冲宽度12.3微秒，混合时间100.0毫秒，¹H NMR谱的谱宽为6.25kHz，采样点数32768，采样时间2.62秒，延迟等待时间2.0秒，累加320次，得到样品的核磁共振信号；(a5)用核磁共振谱仪自带的数据处理软件对样品的核磁共振信号进行傅里叶变换，变换点数为131072，指数线宽因子为0.3Hz，手动调相位和基线校正，2,2,3,3‑氘代三甲基硅烷丙酸钠作为内标物，共振峰设为δ0.00，进行化学位移定标，得到样品的¹H NMR谱图；(a6)对¹H NMR谱图进行分段积分，积分范围为化学位移δ0.1‑δ6.0之间，积分间隔为δ0.01，将¹H NMR谱中δ4.73‑4.93区域的信号剔除，采用峰面积归一化，得到571个强度积分相对值，为一组数据；(a7)在N个洋槐蜜样品中，逐一取样品，按照步骤(a3)～(a6)的方法，得到N组数据，每组数据为一行，构成洋槐蜜样品的强度积分相对值数据矩阵，矩阵大小为N×571；b建立油菜蜜的氢核磁共振数据库(b1)收集M个油菜蜜样品，M不少于60；(b2)在M个油菜蜜样品中，逐一取样品，按照步骤(a3)～(a6)的方法，得到M组数据，每组数据为一行，构成油菜蜜样品的强度积分相对值数据矩阵，矩阵大小为M×571；c待鉴别蜂蜜样品的氢核磁共振测试将待鉴别的K个蜂蜜样品按步骤(a3)～(a5)的方法进行¹H NMR测试，对¹H NMR谱图按照步骤(a6)进行分段积分，得到K组数据，每组数据为一行，构成待鉴别蜂蜜样品的强度积分相对值数据矩阵，矩阵大小为K×571；d因子分析将洋槐蜜样品的强度积分相对值数据矩阵、油菜蜜样品的强度积分相对值数据矩阵与待鉴别蜂蜜样品的强度积分相对值数据矩阵进行组合，形成蜂蜜样品强度积分相对值数据矩阵，矩阵大小为(N+M+K)×571；对蜂蜜样品强度积分相对值数据矩阵进行因子分析，提取特征值大于1.0的n个因子，这n个因子的累计贡献率大于99.0％，并根据因子得分系数矩阵计算出将洋槐蜜样品、油菜蜜样品和待鉴别蜂蜜样品的因子得分；e判别分析对洋槐蜜样品和油菜蜜样品的因子得分进行判别分析，得到非标准化的典型判别函数；将洋槐蜜样品、油菜蜜样品和待鉴别蜂蜜样品的因子得分作为变量代入非标准化的典型判别函数，计算得到洋槐蜜样品、油菜蜜样品和待鉴别蜂蜜样品的判别函数值。根据判别函数值，可以计算出洋槐蜜组和油菜蜜组的质心坐标；计算洋槐蜜组中的每个样品到洋槐蜜组质心坐标的平方马氏距离以及油菜蜜组中的每个样品到油菜蜜组质心坐标的平方马氏距离；根据待鉴别蜂蜜样品的判别函数值，计算与洋槐蜜组、油菜蜜组质心坐标的平方马氏距离；如果待鉴别蜂蜜样品到洋槐蜜组质心坐标的平方马氏距离小于到油菜蜜组质心坐标的平方马氏距离，并且待鉴别蜂蜜样品到洋槐蜜组质心坐标的平方马氏距离不大于洋槐蜜组样品平方马氏距离的最大值，则将待鉴别蜂蜜样品归属为洋槐蜜；如果待鉴别蜂蜜样品到油菜蜜组质心坐标的平方马氏距离小于到洋槐蜜组质心坐标的平方马氏距离，并且待鉴别蜂蜜样品到油菜蜜组质心坐标的平方马氏距离不大于油菜蜜组样品平方马氏距离的最大值，则将待鉴别蜂蜜样品归属为油菜蜜。