[发明专利]一种烟草黑胫病抗性单株的鉴定方法

摘要

本发明公开了一种烟草黑胫病抗性单株的鉴定方法。所述方法通过组培快繁获得长势整齐的待接种烟苗，经贴敷接种处理，将长满黑胫病菌菌丝的培养基平板小块贴于微伤的烟苗根茎部，处理后的烟苗在温湿可控的人工气候室中培养，以接种后第14天的调查结果进行抗性判别，按发病率a划分抗感性。免疫或高抗的发病率为a=0，抗病的发病率为0＜a≤25%，中抗的发病率为25%＜a≤45%，中感的发病率为45%＜a≤65%，感病的发病率为65%＜a≤80%，高感的发病率为80%＜a≤100%，其中免疫或高抗、抗病、中抗的即为抗性材料。所述方法鉴定结果重现性高，稳定性好，效率高，可实现大规模抗性鉴定，特别适合从数量庞大的诱变群体或突变群体、杂交变异群体中筛选抗病靶标单株。

主权项

一种烟草黑胫病抗性单株的鉴定方法，其特征在于包括组培快繁、贴敷接种、烟苗培养及抗性判别工序，具体包括：A、组培快繁：取团棵期至旺长期烟草单株的最幼嫩顶叶叶片组织，常规消毒，切取小叶圆片不经愈伤组织直接培养成苗，形成群体后，筛选长势一致的单株组培苗移栽至漂浮盘上煅苗5~7天后，按常规漂浮育苗方式继续培育至5~6片真叶苗，挑选长势整齐的烟苗移栽至装有育苗基质的栽培盆中，待烟苗成活后，剪叶，整苗，以备接种；B、贴敷接种：用已消毒的打孔器，从长满黑胫病菌菌丝的培养基平板中打取直径或边长4~6mm的菌丝块，将长满菌丝的一面贴于微伤的烟苗根茎部，用保湿透气材料包裹烟苗根茎部的菌丝块贴敷处，每株烟苗贴敷菌丝块1块；以抗性品种RBST和感病品种红花大金元进行同样的处理作为对照；C、烟苗培养：将接种后的烟苗置于盛有水的浅盘中，维持土壤湿润，在25~28℃，相对湿度75%以上，12h光照12h黑暗交替的人工气候室中培养不少于14天；D、抗性判别：接种后第3天开始观察发病情况，第7天、第14天各调查1次，以最后一次调查的结果统计病情，烟草黑胫病以株为单位调查，以接种点病斑扩展、烟苗凋萎记作发病，以接种点病斑不扩展、烟苗直立、生长正常记作不发病，调查所有接种烟苗，以发病率a统计病情，按发病率a划分抗感性，免疫或高抗的发病率为a=0，抗病的发病率为0＜a≤25%，中抗的发病率为25%＜a≤45%，中感的发病率为45%＜a≤65%，感病的发病率为65%＜a≤80%，高感的发病率为80%＜a≤100%，其中免疫或高抗、抗病、中抗的即为抗性材料。