[发明专利]一种水产品细菌性疾病的快速检测试剂盒及应用

摘要

本发明涉及一种水产品细菌性疾病的快速检测试剂盒及应用，该试剂盒包括：DNA提取试剂，包括缓冲试剂A和细胞裂解试剂B；PCR反应试剂，包括10倍聚合酶链式反应缓冲液、氯化镁溶液、dNTP、引物VP₀₁、引物VP₀₂、Taq酶与无核酸酶灭菌水；PCR杂交液，包括20倍柠檬酸钠缓冲溶液、十二磺基硫酸钠溶液、甲酰胺3-5μL与Denhardt`s溶液。本发明还提供该试剂盒的应用。本发明检测十分快速，5-6h即可得知检测结果；本发明检测灵敏度高；本发明可以检测多种细菌病毒，如黄杆菌属、弧菌属、霍乱弧菌、哈维氏弧菌、溶藻弧菌、创伤弧菌、副溶血性弧菌、嗜水性气单胞菌、链球菌属等。

主权项

一种水产品细菌性疾病的快速检测试剂盒，所述快速检测试剂盒包括：a)DNA提取试剂一份：含缓冲试剂A和细胞裂解试剂B，缓冲试剂A含有NaCl 0.1‑0.3mol/L，pH为7.8‑8.2的三羟基甲基氨基甲烷1‑80mmol/L，pH为7.8‑8.2的乙二胺四乙酸0.1‑8mmol/L与体积分数为10‑20％的曲拉通X‑100；细胞裂解试剂B含有浓度为1‑10mg/mL的溶菌酶与pH为7.8‑8.2的三羟基甲基氨基甲烷1‑80mmol/L；其特征在于，所述快速检测试剂盒还包括：b)PCR反应试剂甲一份：PCR反应试剂甲含有10倍聚合酶链式反应缓冲液2‑4μL、22‑27mmol/L的氯化镁溶液1‑3μL、2.2‑2.7mmol/L的dNTP 1‑3μL、3‑7mmol/L的引物VP₀₁0.1‑1μL、3‑7mmol/L的引物VP₀₂0.1‑1μL、3‑7U的Taq酶0.1‑0.5μL与无核酸酶灭菌水10‑15μL；c)PCR反应试剂乙一份：PCR反应试剂乙含有10倍聚合酶链式反应缓冲液2‑4μL、22‑27mmol/L的氯化镁溶液1‑3μL、2.2‑2.7mmol/L的dNTP 1‑3μL、3‑7mmol/L的引物VP₀₃0.1‑1μL、3‑7mmol/L的引物VP₀₄0.1‑1μL、3‑7U的Taq酶0.1‑0.5μL与无核酸酶灭菌水10‑15μL；d)PCR杂交液一份：PCR杂交液由20倍柠檬酸钠缓冲溶液1‑5μL、体积分数为10％的十二磺基硫酸钠溶液0.1‑0.5μL、质量分数为25％的甲酰胺3‑5μL与50倍Denhardts溶液1‑3μL组成。