[发明专利]一种基于生化初筛及荧光纳米生物探针检测沙门菌的方法有效

专利信息
申请号: 201510318870.8 申请日: 2015-06-11
公开(公告)号: CN104975065B 公开(公告)日: 2018-02-06
发明(设计)人: 唐锋 申请(专利权)人: 唐锋
主分类号: C12Q1/10 分类号: C12Q1/10;G01N33/569;C12R1/42
代理公司: 武汉楚天专利事务所42113 代理人: 雷速
地址: 430013 湖北省武汉*** 国省代码: 湖北;42
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摘要: 发明一种基于生化初筛及荧光纳米生物探针检测沙门菌的方法,用含培养基的拭子采样并培养,通过观测其是否产生硫化亚铁形成的黑斑而筛选出硫化氢反应阳性的拭子,然后将其与特异性抗体偶联的量子点纳米探针溶液孵育,实现探针对靶向菌的特异性结合。通过观测拭子上的量子点偶合物荧光信号达到检测靶向菌的目的。本发明配合设计的带截止滤光片及荧光激发光源的体视镜制成的人工荧光观测仪或激光共聚焦显微镜,实现可视化判断结果,可操作性强,适合广泛应用于大批量样品的实际检测工作。本发明的操作简单、特异性强、准确度高、效率高,可以在一天内完成初筛,两天完成靶向菌的分离。所需的拭子、培养基、生物探针均易于制备,适合产业化生产。
搜索关键词: 一种 基于 生化 荧光 纳米 生物 探针 检测 沙门 方法
【主权项】:
一种基于生化初筛及荧光纳米生物探针高效分离沙门菌的非诊断方法,其特征在于,包括如下步骤:A)含培养基拭子的制作:将适于沙门菌生长的培养基加入用吸水材料所制作的拭子中,晾干备用,其拭子分为棉签状、纸片状两种;B)取样培养:使用步骤A处理后的拭子加入定量样本,37℃培养18~48小时;C)可疑样品的筛选:肉眼观察拭子生长情况,筛选产生黑色斑点的拭子;然后将其放入含沙门菌特异性抗体偶联的水溶性量子点生物探针溶液中,37℃孵育15分钟或者4~8℃低温冷孵育过夜,然后将拭子放于人工荧光观测仪或者激光共聚焦显微镜下观察,并提供与量子点相应波长的激发光源,有荧光斑或丝出现者为阳性,且可以判定为标本携带沙门菌;D)直接挑取黑斑、荧光斑的部分培养物,转至鉴别平板培养基上划线分离,获取沙门菌的纯分离株,以供作其它试验用;所述拭子为棉签状拭子或者纸片状拭子;所述棉签状拭子,由长25~30mm,宽9~10mm,重0.1~0.2g的100%医疗级脱脂棉纤维和一个14.5cm长的柄构成,其制备方法为,将棉签状拭子置于和棉签状拭子相适应的长筒状容器内,添加1.0~2.0ml培养基后于35℃~45℃无菌环境干燥48小时,置于4℃备用;所述纸片状拭子,由长10~15cm,宽2.2~2.8cm的3号层析滤纸片构成,其制备方法为将纸片状拭子折叠后放于密封袋内,添加1.0~2.0ml培养基后于35℃~45℃无菌环境干燥48小时,置于4℃备用;所述适于沙门菌生长的培养基每毫升中含有40毫克的多价蛋白胨,5毫克氯化钠,10毫克普通蛋白胨,0.6毫克柠檬酸铁胺,12毫克硫代硫酸钠,0.6毫克亮氨酸,8微克胆盐,补加蒸馏水至1毫升,调pH值至7.4。
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