[发明专利]一种快速检测纺织品中白假丝酵母菌的方法在审
| 申请号： | 201510151308.0 | 申请日： | 2015-04-01 |
| 公开（公告）号： | CN104830956A | 公开（公告）日： | 2015-08-12 |
| 发明（设计）人： | 李轲;郭会清;禹建鹰;王永杰;苗丽;白杰;杨娜;乔晴;王新辉;王珊 | 申请（专利权）人： | 郭会清 |
| 主分类号： | C12Q1/06 | 分类号： | C12Q1/06 |
| 代理公司： | 北京风雅颂专利代理有限公司 11403 | 代理人： | 李阳 |
| 地址： | 450000 河南省郑*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本发明涉及纺织品微生物鉴定领域，特别是一种快速鉴定纺织品中白假丝酵母菌的方法，针对现有纺织品中白假丝酵母菌鉴定过程中所存在的问题，其解决问题的技术方案是一种快速鉴定纺织品中白假丝酵母菌的方法，包括以下步骤：步骤一：检样采集；步骤二：样液制备；步骤三：样液稀释，过滤；步骤四：白假丝酵母菌检测培养；步骤五：Biotyper系统标准品溶液和基质溶液的制备；步骤六：用甲酸提取法提取菌落蛋白；步骤七：MALDI BioTyper自动鉴定；步骤八：结果计算：本发明中纺织品中白假丝酵母菌鉴定方法考虑了各种样品面积的大小、及厚度，采集的样品更具代表性，使检测结果更准确，该方法高度自动化，减少实验误差，不需要其他附加实验，节约检测成本。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 快速 检测 纺织品 中白假丝 酵母菌 方法 | ||
【主权项】：
一种快速检测纺织品中白假丝酵母菌的方法，包括以下步骤：步骤一：检样采集在送检的纺织品四周和中间均匀布控5个～10个采样点，用灭菌不锈钢直尺测量，根据纺织品面积大小，每件纺织品共采集5份～10份检样；采样面积可按送检的纺织品面积大小扩大或缩小；步骤二：样液制备将采集好的5份～10份检样放入盛有200mL灭菌生理盐水的全滤网无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，得到一个生理盐水样液，制成样液作为原液，如果被检样品大量吸水而导致不能吸出足够样液时，灭菌生理盐水量可按每次100mL递增，直至能抽提有足够100mL～120mL的测试样液；每个样液30min内抽提检测完毕；步骤三：样液稀释，过滤将步骤二制备的样液稀释后用滤膜过滤备用，每张滤膜过滤100mL样液，应根据样品污染情况确定样液的稀释倍数，以滤过一张无菌滤膜后能产生小于100个菌落为宜，如果样品污染严重，可将样液原液按10倍递增稀释，取100mL稀释液过滤；步骤四：白假丝酵母菌检测培养用无齿灭菌镊子夹取孔径为0.45μm微孔灭菌滤膜边缘部分，将粗糙面向上，贴放在已灭菌的滤床上，固定好滤器，将过滤后的样液注入滤器中，打开滤器阀门，在负0.5×105Pa下抽滤，样液滤完后，再抽气约5s，关上滤器阀门，取下滤器，用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分，移放在孟加拉红培养基平板上，滤膜截留细菌面向上，滤膜应与培养基完全贴紧，两者间不留气泡，然后将孟加拉红平板放入28℃±1℃培养箱内培养24h～48h，白假丝酵母菌在孟家拉红培养基养出的菌落具有以下特征，浅粉色大的形状不规则菌落，中心凹陷，边缘色浅不整齐，表面干燥，有的菌落有明显菌丝，酿酒酵母菌在孟家拉红培养基培养出的菌落具有以下特征：无菌丝，边缘整齐，浅粉色，中心凹陷的大菌落；每个平板上挑取5个可疑菌落，用微生物快速检测系统(MALDI BioTyper)进行验证；步骤五：微生物快速检测系统(MALDI BioTyper)专用的标准品溶液和基质溶液的制备使用微生物快速检测系统(MALDI BioTyper)专用的标准品Bacterial Test Standard(BTS)加入标准溶剂50％乙腈+47.5％水+2.5％三氟乙酸50μl，使用移液器反复吹吸的方式，溶解BTS粉末(不能剧烈震荡溶解)；室温放置5min，之后重复吹吸，13000rpm离心2min，分装，‑20℃冰箱保存，禁止反复冻融溶解好的BTS，每次使用取一管；使用微生物快速检测系统(MALDI BioTyper)专用的基质HCCAportioned加入50％乙腈+47.5％水+2.5％三氟乙酸50μl)250μl标准溶剂(终浓度10mg/mL)，振荡混匀，直到形成澄清溶液；步骤六：用甲酸提取法提取菌落蛋白在EP管中加入300μl去离子水，取待测微生物样本至离心管中，使用移液枪吹吸或涡旋振荡充分混匀，加入900μl乙醇，充分混匀；13000rpm离心2min，倒去上清，再次离心，使用移液枪完全去除残余的上清液，整个过程不应触碰沉淀；室温下干燥沉淀2min～3min；加入70％甲酸水溶液1μl～80μl，根据生物样品量能充分混合为准，通过移液枪吹吸或者涡旋振荡充分混合，加入与甲酸等体积纯乙腈，充分混匀，13000rpm离心2min，吸取1μl上清，滴加到MALDI靶板上，并在室温下晾干，1h内，用1μl HCCA基质溶液覆盖上述样液点，并在室温下晾干；步骤七：微生物快速检测系统(MALDI BioTyper)自动鉴定将靶板放入仪器，自动鉴定结果，与标准图谱对照确定白假丝酵母菌；步骤八：结果计算：然后由步骤七鉴定出的结果来直接计数孟加拉红培养基平板上对应为白假丝酵母菌特征菌落，以每平方厘米样液中的白假丝酵母菌个数报告结果,按式(1)计算，![]()
如果样品原液培养基上无菌落长出，结果报告为0CFU/cm2；如果10倍样品稀释液培养基上无菌落长出，结果报告为＜10 CFU/cm2；若检测为白假丝酵母菌，则选择培养基上菌落数小于100 CFU的平板计数，按式(1)计算报告。根据权利要求1所述的一种快速检测纺织品中白假丝酵母菌的方法，其特征在于步骤一中检样采集每个采样点按5cm×5cm面积范围剪裁，每25cm2采样面积为1份检样。根据权利要求1所述的一种快速检测纺织品中白假丝酵母菌的方法，其特征在于步骤七中微生物自动检测所用仪器为微生物快速检测系统(MALDI BioTyper)。
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- 一种辅助生殖用液体试剂的安全性检测方法，所用方法依据国际通用的1‑细胞胚胎方法，对相关方法进行改良，在所用的检测方法中，使用PVA和不含血清蛋白培养液结合的方法，应用去除透明带的小鼠胚胎分别进行囊胚数量和囊胚率或囊胚扩展率的统计，双重标准反映待测液体试剂的质量，从而提高了本方法验证胚胎液体试剂的质量敏感性和可靠性。
- 一种公共卫生医学集菌检测装置-201711339656.6
- 彭广斌;苏成轶;张良;张文波 - 徐州天荣医疗通讯设备有限公司
- 2017-12-14 - 2019-07-02 - C12Q1/06
- 本发明公开了一种公共卫生医学集菌检测装置，涉及医疗设备领域，该公共卫生医学集菌检测装置在使用时先将箱体搬运至被检测区域，然后打开抽风机将空气抽入抽风管内，并且通过过滤膜过滤掉空气中的细菌，然后打开清洗机，将过滤膜中的细菌冲入检测筒内，再通过生物细菌传感器检测出细菌含量，并且通过显示屏反应具体数值。该公共卫生医学集菌检测装置可通过抽风机将被测地区的空气吸到过滤膜上，然后检测起细菌含量，适合现场检测空气中的细菌。
- 一种细菌培养检测方法-201910150349.6
- 杨海兵;征友楷;赵万千 - 张家港高品诚医械科技有限公司
- 2019-02-28 - 2019-06-14 - C12Q1/06
- 本发明公开了一种细菌培养检测方法，包括以下步骤：（1）在培养瓶底部放入感光芯片；感光芯片包括CO2/pH传感芯片和O2分压传感芯片、裹设于传感芯片表面的荧光胶层；CO2/pH传感芯片激发的第一发射光的荧光强度随着培养液pH值的降低而增大；O2分压传感芯片激发的第二发射光的荧光强度随着培养液中O2含量的降低而增大；（2）在培养瓶中放入细菌和培养液，接着通入生长气体后密封；（3）根据需要调节培养瓶的温度；（4）用光源透过培养液照射感光芯片；（5）采集不同时间点时第一发射光和第二发射光的荧光强度；根据荧光强度的变化确定培养液中细菌的含量变化。本发明一种细菌培养检测方法，步骤简单，成本低，操作难度较低，检测效果较好，准确度较高。
- 细胞测定方法-201780067287.1
- 南条祐子;浅野宏幸;宫川功;高田仁夫 - 仓敷纺绩株式会社
- 2017-10-20 - 2019-06-14 - C12Q1/06
- 本发明提供一种准确度高的细胞测定方法。本发明的细胞测定方法包括：将靶细胞以色素染色的工序；获取所述靶细胞的图像的图像获取工序；通过对所述图像进行多阶段二值化处理来判别所述靶细胞与夹杂细胞的判别工序；基于所述判别工序的结果，自所述图像中排除由所述夹杂细胞引起的杂讯的工序；以及通过将排除了所述夹杂细胞的图像的细胞量的指标进行积算来评价所述靶细胞量的工序。
- 一种用于检测水华或赤潮水体中单一藻类生物量的方法-201811535279.8
- 赵洋甬 - 浙江易测环境科技有限公司
- 2018-12-14 - 2019-06-07 - C12Q1/06
- 本发明公开了一种用于检测水华或赤潮水体中单一藻类生物量的方法，包括以下步骤：建立单一藻类生物量与色彩参数的关系方程；取水样并使用滤膜抽滤，使用色差计分析抽滤后滤膜的色彩参数，并使用显微镜观察藻的种类；根据藻的种类和色彩参数，通过色彩参数与生物量的关系方程，计算对应的生物量。本发明的目的在于提供一种用于检测水华或赤潮水体中单一藻类生物量的方法，可快速、高精度的测定水体中藻类叶绿素a的浓度，并且成本较低。
- 耐重金属微生物的土壤定殖能力的检测方法-201910127806.X
- 谭石勇;张冬雪;郭帅;谭武贵;文亚雄 - 湖南泰谷生态工程有限公司
- 2019-02-20 - 2019-05-31 - C12Q1/06
- 本发明提供一种耐重金属微生物的土壤定殖能力的检测方法，通过将微生物在梯度浓度的重金属离子的液体培养基和平板上进行交替培养、逐级诱导方式类推出微生物对重金属的最终耐受浓度，再在耐受浓度中进行交替培养，确保菌株耐受的稳定性，得到标记菌株；以原始菌株为对照，比对标记菌株，采用梯度稀释法检测土壤待测样品中的菌落数，通过比较二者菌落数来判断耐重金属微生物在土壤中的定殖情况。本发明由于土壤中土著微生物未经驯化培养不能耐受较高浓度重金属，因此可快速且有效检测出重金属耐受性标记菌株，并分析其定殖能力，为菌株的进一步深化研究提供参考；对农业领域生物肥料、生物农药等筛选耐受重金属的微生物菌剂具有重要的指导意义。
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