[发明专利]一种治疗骨性关节炎的组合物的制备方法

摘要

一种治疗骨性关节炎的组合物的制备方法，涉及一种组合物、其制备方法及其应用。本发明提供一种治疗骨性关节炎的组合物、其制备方法及其应用。该组合物的有效成分包括间充质干细胞和细胞因子，细胞因子由富含FGF2的血浆和富含VEGF的血浆。方法：一、富血小板血浆制备；二、富FGF2因子血浆制备；三、富VEGF因子血浆制备；四、将富FGF2因子血浆和富VEGF因子血浆混合，将混合后的血浆在25～60mmHg氧分压下平衡，加入间充质干细胞，即得到治疗骨性关节炎的组合物。在组合物制备过程中，采用了与人类关节内氧分压相似的供氧环境，促进了干细胞的适应能力，起到更好的骨性关节炎修复作用。用于制备治疗骨性关节炎药物。

主权项

1.一种治疗骨性关节炎的组合物的制备方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：一、富血小板血浆制备：将20～120mL外周血分装在50mL离心管中，于200～400g、4℃条件下离心10～30min，去掉下层红细胞，保留上层血小板血浆，混匀后，于500～1000g条件下二次离心10～30min，去掉部分上层血浆，将剩余血浆和下层血小板混合均匀，从而得到富集2～7倍的富血小板血浆；二、富FGF2因子血浆制备：在步骤一制备的富血小板血浆中无菌添加120～150IU/mL人凝血酶和12～15mg/mLCaCl2，在20～37℃恒温培养箱中培养1～6小时，将上述培养物经800～1500g、4℃离心10～30min，其上清液即为FGF2浓度在40～80pg/mL的富FGF2因子血浆；三、富VEGF因子血浆制备：在步骤一制备的富血小板血浆中无菌添加10～30IU/mL人凝血酶和1～3mg/mL CaCl2，在20～37℃恒温培养箱中培养中72～144小时，将上述培养物经800～1500g、4℃离心10～30min，其上清液即为VEGF浓度在150～350pg/mL的富VEGF因子血浆；四、将富FGF2因子血浆和富VEGF因子血浆按体积比1:3～10的比例混合，将混合后的血浆在25～60mmHg氧分压下，37℃平衡4～8小时，然后向平衡后的混合血浆中加入间充质干细胞，混合血浆中间充质干细胞的浓度为5×105～5×107个/mL，即得到治疗骨性关节炎的组合物。