[发明专利]一种适合基因叠加的载体及其应用

摘要

本发明公开了一种适合基因叠加的载体及其应用。该载体含有attP或attB位点及其一侧的lox位点；含有筛选和报告基因及其两侧的lox位点；在上述attP或attB、lox、标记和报告基因连接好的片段两侧还有RS2或MRS位点。将上述载体通过T‑DNA序列整合到水稻基因组中，可获得产生用于水稻基因叠加的株系。其中适合基因叠加的水稻基因组位点有7个，在该7个位点中可以将多个目的基加叠加在此处得到高效表达，可减少分离位点的数目，大大降低了将转基因从实验室品系导入农田品种过程中的工作量，且几乎不影响其他基因的正常表达，使商业产品研发者能够将新的基因叠加到现有的转基因位点。

主权项

1.水稻基因组位点在插入水稻基因叠加载体中的应用，该基因组位点为：1)水稻染色体8的长臂第16,669,154位碱基和第16,669,159碱基位之间；2)水稻染色体5的长臂第27,601,556位碱基和第27,601,606位碱基之间；3)水稻染色体1的短臂第9,639,408位碱基和第9,639,426位碱基之间；4)水稻染色体2的短臂第5,187,205位碱基和第5,187,244位碱基之间；5)水稻染色体5的长臂第27,877,812位碱基和第27,877,843位碱基之间；6)水稻染色体1的长臂第32,100,641位碱基和第32,100,689位碱基之间；7)水稻染色体1的长臂第35,913,934位碱基和第35,913,966位碱基之间；基因组信息参照水稻基因组数据库Os‑Nipponbare‑IRGSP‑1.0；所述水稻基因叠加载体中含有DNA片段4，所述DNA片段4中含有DNA片段1和DNA片段2，以及MRS重组位点或RS2重组位点；其中，所述DNA片段1含有attP或attB重组位点，以及位于attP或attB重组位点一侧的大肠杆菌噬菌体P1中的lox重组位点；所述DNA片段2含有目的基因，以及位于该目的基因两侧的大肠杆菌噬菌体P1中的lox重组位点，通过该2个lox重组位点的重组可以将目的基因删去，该2个lox重组位点同向，且与片段1中的lox重组位点方向相反；上述DNA片段1和片段2按任意顺序连接构成DNA片段3；上述DNA片段3两侧连有能够删除该DNA片段3的MRS重组位点或RS2重组位点；所述MRS重组位点或RS2重组位点与DNA片段3构成所述的DNA片段4。