[发明专利]一种基于DART-MS/MS测定家蚕中谷丙转氨酶活力的方法

摘要

一种基于DART-MS/MS测定家蚕中谷丙转氨酶活力的方法,包括如下步骤：(1)DART-MS/MS检测；(2)谷丙转氨酶活力单位；(3)谷丙转氨酶活力计算公式；(4)谷丙转氨酶活力测定。本发明采用DART-MS/MS作为检测手段，可直接检测酶反应过程中的生成物丙氨酸，该方法具有检测快速、检测灵敏度高，抗干扰能力强和定量准确等特点。本发明在检测过程中不需要加入2,4-二硝基苯肼避免了污染和干扰。该方法操作简便、检测快速，便于推广和应用。

主权项

一种基于DART‑MS/MS测定家蚕中谷丙转氨酶活力的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)DART‑MS/MS检测：采用DART离子源和三重四级杆质谱在正离子模式或负离子模式下对丙氨酸进行检测，载气为氮气，加热温度为200‑500℃，Grid voltage范围为100‑400V，气压为0.2‑0.5MPa，检测方式为反应监测模式(SRM)，碰撞电压为0‑200eV，碰撞气压为0‑5mTorr；(2)谷丙转氨酶活力单位：谷丙转氨酶活力定义为1mL的酶液在38±1℃，水浴10min，生成1μmol丙氨酸的量作为1个酶活力单位，活力单位为U/mL；(3)谷丙转氨酶活力计算公式：(4)谷丙转氨酶活力测定：测定组：将家蚕后部丝腺组织液与5mmol/L的谷氨酸溶液、4mmol/L丙酮酸钠、pH＝7.4的磷酸盐缓冲液按照1:1:1:2的体积比例进行充分混合，在38±1℃恒温水浴锅中反应10min，放入70℃水浴30min‑1h，将得到的反应液按照步骤(1)中所给条件进行DART检测；空白组：采用超纯水代替测定组中的家蚕后部丝腺组织液液，其他条件与测定组一致进行反应，然后将得到的反应液按照步骤(1)中所给条件进行DART检测。