[发明专利]一种从大豆乳清中回收Kunitz及Bowman-Birk型胰蛋白酶抑制剂的方法

摘要

一种从大豆乳清中回收Kunitz及Bowman−Birk型胰蛋白酶抑制剂的方法，属于农产品加工及副产品综合利用领域。本发明方法包括以下步骤：（1）大豆乳清的预处理；（2）大豆乳清蛋白的初级分离；（3）大豆乳清蛋白与聚阴离子多糖复凝聚；（4）回收Kunitz及Bowman−Birk型胰蛋白酶抑制剂。原料预处理，初级分离后经复凝聚得到终蛋白多糖复合物，终蛋白多糖复合物经超滤除糖，超滤脱盐，二次离心后即得含有纯化Kunitz及Bowman−Birk型胰蛋白酶抑制剂的蛋白溶液，该蛋白溶液经过真空冷冻干燥得到Kunitz及Bowman−Birk型胰蛋白酶抑制剂高纯度样品。本发明对大豆乳清综合利用，设备要求低，操作简单，无环境污染。且胰蛋白酶抑制剂回收率高，纯度高，蛋白活性高。

主权项

1.一种从大豆乳清中回收Kunitz及Bowman −Birk型胰蛋白酶抑制剂的方法，其特征在于步骤为：（1）大豆乳清的预处理：将大豆乳清调至pH 4.5‑4.8，9500rpm离心30min除沉淀；再次调至pH 8.0‑10.0，9500rpm离心30min，收集上清液，得试验用大豆乳清液；用pH调节剂调节pH；（2）大豆乳清蛋白的初级分离：量取一定体积的上述大豆乳清液，调节pH至4.5‑5.0，在4‑30℃下，加入硫酸铵至终饱和度为30%‑40%，9500rpm离心30min，收集沉淀，加入去离子水溶解，使蛋白质量终浓度为1%‑10%，截留分子量3500透析脱盐36‑48h，截留液真空冷冻干燥，获得含有Kunitz及Bowman −Birk型两种胰蛋白酶抑制剂的大豆乳清蛋白组分；（3）大豆乳清蛋白与聚阴离子多糖复凝聚：将步骤（2）制备的大豆乳清蛋白组分，用去离子水配制w/v终浓度为0.1%‑0.4%的大豆乳清蛋白溶液，调节pH至7.0，并同时配制w/v 0.1%‑0.4%的聚阴离子多糖溶液，调节pH至7.0；向上述大豆乳清蛋白溶液中缓慢加入v/v 2.5% ‑10%的聚阴离子多糖溶液，调节pH至5.0‑3.0，4000rpm离心20min，收集沉淀；对上清液再次加聚阴离子多糖溶液重复沉淀1‑2次，合并沉淀物，即得Kunitz型胰蛋白酶抑制剂与聚阴离子多糖的复凝聚物；合并上述去沉淀后的上清液，继续缓慢加入v/v 5% ‑10%的聚阴离子多糖溶液，调节pH至4.5‑3.8，4000rpm离心20min，收集上清液，即得含有Bowman −Birk型胰蛋白酶抑制剂与聚阴离子多糖的复合物溶液；（4）回收Kunitz及Bowman −Birk型胰蛋白酶抑制剂：将得到的Kunitz型胰蛋白酶抑制剂/聚阴离子多糖的复凝聚物悬浮于2‑3倍体积的去离子水中，调节pH至7.0‑9.0，过超滤膜100kD‑300kD除糖，收集滤过液；截留分子量3000‑4000超滤脱盐，截留液真空冷冻干燥，即得纯化的Kunitz型胰蛋白酶抑制剂；将得到的Bowman −Birk型胰蛋白酶抑制剂/聚阴离子多糖的复合物溶液，调节pH至7.0‑9.0，过超滤膜100kD‑300kD除糖，收集滤过液；截留分子量3000‑4000超滤脱盐，截留液真空冷冻干燥，即得纯化的Bowman −Birk型胰蛋白酶抑制剂。