[发明专利]一种信号放大免疫检测方法

摘要

本发明公开了一种信号放大免疫检测方法。该方法是利用过滤器进行信号放大免疫定量检测的方法，为采用过滤器(过滤层内的过滤芯为偶联了待检物的特异性结合物的固相材料)依次将含有待检物的待检样本溶液A、经亲和素标记的检测物(能够与所述待检物特异性结合)溶液B、经生物素标记的指示剂溶液C过滤，从而根据指示剂的颜色或光量变化计算溶液A中待检物的量。实验证明，本发明亲和素-生物素放大这一反应顺序，与常规的生物素-亲和素放大反应顺序相比，具有更强的生物信号放大效果。该方法可用于检测包括来源于人体和动物体可进行疾病诊断和健康检测的样品以及用于环境、药物分析、食品和工业分析的样品定量免疫检测的产品开发中的应用。

主权项

一种利用过滤器进行信号放大免疫定量检测的方法，其特征在于：所述过滤器由入口、过滤层和出口组成，所述过滤层内的过滤芯为偶联了待检物的特异性结合物的固相材料；所述方法为如下(A)‑(D)中任一种：(A)包括如下步骤：1)将溶液A注入所述过滤器中，所述溶液A为含有待检物的待检样本溶液，所述待检物被所述过滤芯特异性捕获，形成“过滤芯‑待检物”复合物，记为复合物1；2)将溶液B注入所述过滤器中，所述溶液B为经亲和素标记的检测物的溶液，所述经亲和素标记的检测物为能够与所述待检物特异性结合的物质，所述经亲和素标记的检测物与被所述过滤芯特异性捕获的所述待检物特异性结合，形成“过滤芯‑待检物‑经亲和素标记的检测物”复合物，记为复合物2；3)将溶液C注入所述过滤器中，所述溶液C为经生物素标记的指示剂的溶液，所述指示剂为能够直接或间接产生颜色或光量变化的物质，所述经生物素标记的指示剂与所述复合物2中的所述经亲和素标记的检测物相结合，形成“过滤芯‑待检物‑经亲和素标记的检测物‑经生物素标记的指示剂”复合物，记为复合物3；4)检测，按照如下(a)‑(c)中任一进行：(a)直接采用检测器对捕获了所述待检物、所述检测物和所述指示剂的过滤芯进行检测，通过所述指示剂产生的颜色或光量变化计算所述待检物的含量；(b)用洗脱液对所述过滤器进行洗脱，收集含有所述指示剂的洗脱液，用检测器检测所述洗脱液中所述指示剂的颜色或光量变化，进而计算所述待检物的含量；(c)直接用检测器检测从所述过滤器流出的溶液C中所述指示剂的颜色或光量变化，进而计算所述待检物的含量；(B)包括如下步骤：1)将溶液A注入所述过滤器中，所述溶液A为含有待检物的待检样本溶液，所述待检物被所述过滤芯特异性捕获，形成“过滤芯‑待检物”复合物，记为复合物1；2)将溶液D注入所述过滤器中，所述溶液D为非标记检测物的溶液，所述非标记检测物为能够与所述待检物特异性结合的物质，所述非标记检测物与被所述过滤芯特异性捕获的所述待检物特异性结合，形成“过滤芯‑待检物‑非标记检测物”复合物，记为复合物4；3)将溶液E注入所述过滤器中，所述溶液E为经亲和素标记的检测物的溶液，所述经亲和素标记的检测物为能够与所述复合物4中的所述非标记检测物特异性结合的物质，所述经亲和素标记的检测物与所述复合物4中的所述非标记检测物特异性结合，形成“过滤芯‑待检物‑非标记检测物‑经亲和素标记的检测物”复合物，记为复合物5；4)将溶液C注入所述过滤器中，所述溶液C为经生物素标记的指示剂的溶液，所述指示剂为能够直接或间接产生颜色或光量变化的物质，所述经生物素标记的指示剂与所述复合物5中的所述经亲和素标记的检测物相结合，形成“过滤芯‑待检物‑非标记检测物‑经亲和素标记的检测物‑经生物素标记的指示剂”复合物，记为复合物6；5)检测，按照如下(a)‑(c)中任一进行：(a)直接采用检测器对捕获了所述待检物、所述检测物和所述指示剂的过滤芯进行检测，通过所述指示剂产生的颜色或光量变化计算所述待检物的含量；(b)用洗脱液对所述过滤器进行洗脱，收集含有所述指示剂的洗脱液，用检测器检测所述洗脱液中所述指示剂的颜色或光量变化，进而计算所述待检物的含量；(c)直接用检测器检测从所述过滤器流出的溶液C中所述指示剂的颜色或光量变化，进而计算所述待检物的含量；(C)包括如下步骤：1)将溶液A注入所述过滤器中，所述溶液A为含有待检物的待检样本溶液，所述待检物被所述过滤芯特异性捕获，形成“过滤芯‑待检物”复合物，记为复合物1；2)将溶液F注入所述过滤器中，所述溶液F为经生物素标记的检测物的溶液，所述经生物素标记的检测物为能够与所述待检物特异性结合的物质，所述经生物素标记的检测物与被所述过滤芯特异性捕获的所述待检物特异性结合，形成“过滤芯‑待检物‑经生物素标记的检测物”复合物，记为复合物7；3)将溶液G注入所述过滤器中，所述溶液G为亲和素的溶液，所述亲和素与所述复合物7中的所述经生物素标记的检测物相结合，形成“过滤芯‑待检物‑经生物素标记的检测物‑亲和素”复合物，记为复合物8；4)将溶液C注入所述过滤器中，所述溶液C为经生物素标记的指示剂的溶液，所述指示剂为能够直接或间接产生颜色或光量变化的物质，所述经生物素标记的指示剂与所述复合物8中的所述亲和素相结合，形成“过滤芯‑待检物‑经生物素标记的检测物‑亲和素‑经生物素标记的指示剂”复合物，记为复合物9；5)检测，按照如下(a)‑(c)中任一进行：(a)直接采用检测器对捕获了所述待检物、所述检测物和所述指示剂的过滤芯进行检测，通过所述指示剂产生的颜色或光量变化计算所述待检物的含量；(b)用洗脱液对所述过滤器进行洗脱，收集含有所述指示剂的洗脱液，用检测器检测所述洗脱液中所述指示剂的颜色或光量变化，进而计算所述待检物的含量；(c)直接用检测器检测从所述过滤器流出的溶液C中所述指示剂的颜色或光量变化，进而计算所述待检物的含量；(D)包括如下步骤：1)将溶液A注入所述过滤器中，所述溶液A为含有待检物的待检样本溶液，所述待检物被所述过滤芯特异性捕获，形成“过滤芯‑待检物”复合物，记为复合物1；2)将溶液D注入所述过滤器中，所述溶液D为非标记检测物的溶液，所述非标记检测物为能够与所述待检物特异性结合的物质，所述非标记检测物与被所述过滤芯特异性捕获的所述待检物特异性结合，形成“过滤芯‑待检物‑非标记检测物”复合物，记为复合物4；3)将溶液H注入所述过滤器中，所述溶液H为经生物素标记的检测物的溶液，所述经生物素标记的检测物为能够与所述复合物4中的所述非标记检测物特异性结合的物质，所述经生物素标记的检测物与所述复合物4中的所述非标记检测物特异性结合，形成“过滤芯‑待检物‑非标记检测物‑经生物素标记的检测物”复合物，记为复合物10；4)将溶液G注入所述过滤器中，所述溶液G为亲和素的溶液，所述亲和素与所述复合物10中的所述经生物素标记的检测物相结合，形成“过滤芯‑待检物‑非标记检测物‑经生物素标记的检测物‑亲和素”复合物，记为复合物11；5)将溶液C注入所述过滤器中，所述溶液C为经生物素标记的指示剂的溶液，所述指示剂为能够直接或间接产生颜色或光量变化的物质，所述经生物素标记的指示剂与所述复合物11中的所述亲和素相结合，形成“过滤芯‑待检物‑非标记检测物‑经生物素标记的检测物‑亲和素‑经生物素标记的指示剂”复合物，记为复合物12；6)检测，按照如下(a)‑(c)中任一进行：(a)直接采用检测器对捕获了所述待检物、所述检测物和所述指示剂的过滤芯进行检测，通过所述指示剂产生的颜色或光量变化计算所述待检物的含量；(b)用洗脱液对所述过滤器进行洗脱，收集含有所述指示剂的洗脱液，用检测器检测所述洗脱液中所述指示剂的颜色或光量变化，进而计算所述待检物的含量；(c)直接用检测器检测从所述过滤器流出的溶液C中所述指示剂的颜色或光量变化，进而计算所述待检物的含量。