[发明专利]一种桑叶多糖及其分离纯化制备方法和应用

摘要

本发明涉及一种桑叶多糖及其分离纯化制备方法和其在制备抗凝血保健品和药物中的应用。其制备方法是桑叶经粉碎、水提、醇沉、过聚酰胺柱去蛋白、H₂O₂脱色、后经DEAE-sepharose CL-6B离子交换柱和sepharose CL-6B凝胶柱分离纯化得桑叶多糖。本发明实现了对桑叶多糖的进一步分级分离纯化，获得平均分子量为4.5～8.0×10⁴Da桑叶多糖纯品，实验证明，该桑叶多糖具有高的凝血活性，而且安全无毒，可与保健品、药品工艺上可接受的其它原料及辅料开发成具有良好的抗凝血功能的保健品和药品，因而，具有着良好的开发应用前景。

主权项

一种桑叶多糖的分离纯化制备方法，其特征在于具体包括以下步骤：1)粉碎：桑叶经粉碎得桑叶粗粉；2)水提：取桑叶粗粉用热蒸馏水浸泡去杂质后得滤液A；3)醇沉：将步骤2)滤液A浓缩后加入乙醇至乙醇的体积分数达75％‑80％，醇沉12‑24h，离心去除上清液，取其沉淀进行真空冷冻干燥得桑叶粗多糖A；4)过聚酰胺柱去蛋白：将步骤3)得到桑叶粗多糖A用蒸馏水溶解后，离心去除沉淀，经聚酰胺柱层析去蛋白，收集桑叶多糖溶液；5)H₂O₂脱色：将步骤4)收集的多糖溶液经H₂O₂去除色素浓缩后，再次加入乙醇至乙醇的体积分数达75％‑80％，醇沉12‑24h，离心去除上清液，取其沉淀真空冷冻干燥得桑叶粗多糖B；6)DEAE‑sepharose CL‑6B离子交换柱的分离纯化：将步骤5)所得的桑叶粗多糖B溶于蒸馏水中，离心去除沉淀后上DEAE‑sepharose CL‑6B离子交换柱，第一阶段用蒸馏水洗脱，第二阶段用线形梯度为0‑2mol/L NaCl溶液进行梯度洗脱，流速为2.5mL/min，10mL/管，分步收集，洗脱液用苯酚‑硫酸法检测绘制洗脱曲线，洗脱得三个洗脱峰，按洗脱出来的先后顺序，将第二个洗脱峰的洗脱液浓缩、透析、真空冷冻干燥后，得到桑叶多糖MPS‑2；7)sepharose CL‑6B凝胶柱的分离纯化：将步骤6)所得桑叶多糖MPS‑2溶解，离心去滤沉淀后上sepharose CL‑6B凝胶柱，采用0.2mol/L NaCl溶液进行洗脱，分步收集，洗脱液用苯酚‑硫酸法检测绘制洗脱曲线，洗脱得三个洗脱峰，按洗脱出来的先后顺序，将第二个洗脱峰的洗脱液透析、真空冷冻干燥后，得到桑叶多糖MPS‑2b。