[发明专利]天山云杉体细胞胚愈伤组织的诱导培养方法及其专用诱导培养基

摘要

本发明公开了天山云杉体细胞胚愈伤组织的诱导培养方法，是分别于6月下旬、7月下旬和9月分别采集天山云杉球果或种子，消毒并清洗后，分别取出带胚乳的未成熟合子胚、不带胚乳的未成熟合子胚和成熟合子胚接种于培养基上进行诱导培养，得到胚性愈伤组织；同时还提供了专用的诱导培养基。本发明的有益效果为：此诱导方法的建立和培养基的制备，为进入后期天山云杉体细胞胚遗传转化导入实用性目的基因，及克隆奠定了基础，为天山云杉种质保存、人工种子、原生质体培养、树种改良和生态环境建设提供有利条件。

主权项

天山云杉体细胞胚愈伤组织的诱导培养方法，其特征在于，包括以下步骤：1）于6月下旬采集天山云杉球果，即带胚乳的未成熟合子胚，作为材料，将球果用质量百分浓度为0.2%的 HgCl₂溶液消毒10分钟后，用无菌水冲洗3次；用摄子从球果中取出未成熟种子，从侧部划开种壳,取出种仁，划破内种皮，挑开胚乳，将嫩胚同胚乳一起接种于天山云杉体细胞胚愈伤组织的诱导培养基上；每皿培养基中接种4个，重复20次，在温度为23±2℃下暗培养15‑25天，得到白色半透明的胚性愈伤组织；2）于7月下旬采集天山云杉球果，即不带胚乳的未成熟合子胚，作为材料，将球果用质量百分浓度为0.2%的 HgCl₂溶液消毒10分钟后，用无菌水冲洗3次；用摄子从球果中取出基本成熟种子，从纵向裂开种子，取出种胚，接种于天山云杉体细胞胚愈伤组织的诱导培养基上；每皿培养基中接种4个，重复20次，在温度为23±2℃下暗培养15‑25天，得到白色半透明的胚性愈伤组织；3）于9月采集天山云杉成熟种子，即成熟合子胚，作为材料，将种子用质量百分浓度为0.2% 的 HgCl₂溶液消毒5分钟后，用无菌水冲洗3次；用摄子从种子中取出成熟合子胚，接种于天山云杉体细胞胚愈伤组织的诱导培养基上；每皿培养基中接种4个，重复20次，在培养温度为23±2℃下暗培养15‑25天，得到白色半透明的胚性愈伤组织。