[发明专利]一种参葛舒心方HPLC指纹图谱的构建方法

摘要

一种参葛舒心方HPLC指纹图谱的构建方法，包括：供试品溶液制备、对照品溶液制备、高效液相色谱条件、及测定，得到参葛舒心方HPLC指纹图谱。所述参葛舒心方HPLC指纹图谱共检测出17个特征峰，其中归属于葛根的特征峰共有14个；归属于丹参的特征峰共有3个；本发明采用HPLC-DAD-TOF/MS串联技术，对参葛舒心方HPLC标准指纹图谱各色谱峰进行指认；同时采用一测多评法对参葛舒心方中主要有效成分进行含量测定，制定含量限度标准。因此，本发明提供的参葛舒心方HPLC指纹图谱的构建方法，定性定量相结合，建立了一种谱图清晰，成分明确，含量可控的多息指纹图谱，更全面地反映参葛舒心方的质量，有效完善了参葛舒心方的质量控制方法。

主权项

一种参葛舒心方HPLC指纹图谱的构建方法，包括：（1）供试品溶液制备：取参葛舒心方，研细过40目筛，精密称取参葛舒心方0.1g‑10g，精确至0.0001g，用30%‑100%甲醇溶液10‑100mL，超声处理10‑100min，补足重量，过0.22µm微孔滤膜过滤，滤液作为供试品溶液；（2）对照品溶液制备：精密称取葛根素、大豆苷、大豆苷元、葛根素‑7‑木糖苷、葛根素木糖苷、丹参酮ⅡA对照品8.72mg、8.39mg、8.30mg、8.24mg、8.33mg、7.08mg，分别加甲醇10mL制成浓度分别为0.872mg/mL、0.839mg/mL、0.830mg/mL、0.824mg/mL、0.833mg/mL、0.708mg/mL的对照品溶液，摇匀，即得；（3）高效液相色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充相；采用HPLC‑DAD‑TOF/MS串联的方式进行图谱采集，以乙腈为流动相A，以水为流动相B，进行梯度洗脱，时间：0‑70min；检测波长为271nm；柱温25度；流速为1.0mL/min，分流比1:3，梯度洗脱程序如下：时间：0‑30min，乙晴8%‑15%，水92%‑85%；时间：30‑45min，乙腈15%‑35%，水85%‑65%；时间：45‑55min，乙腈35%‑55%，水65%‑45%；时间：55‑70min，乙腈55%‑60%，水45%‑50%；塔板理论数按葛根素峰计算，应不低于4000；（4）测定：分别精密吸取溶液各5μL，进样，用高效液相色谱仪测定，以对照品的色谱峰相对保留时间和峰面积为1，计算相对保留时间和相对峰面积，即得参葛舒心方HPLC指纹图谱；所述参葛舒心方HPLC指纹图谱共检测出17个特征峰，其中归属于葛根的特征峰共有14个；归属于丹参的特征峰共有4个；利用HPLC‑DAD‑TOF/MS技术手段对本发明特征峰进行色谱峰归属及紫外吸收曲线的比较，并通过质谱中分子离子峰的精确分子量匹配、保留时间匹配信息的比较指证：1号峰为葛根素‑4ˊ‑O‑D‑葡萄糖苷，2号峰为大豆苷元‑4ˊ，7‑二葡萄糖苷，3号峰为3ˊ‑羟基葛根素，4号峰为葛根素，5号峰为3ˊ‑甲氧基葛根素，6号峰为葛根素‑7‑木糖苷，7号峰为葛根素‑木糖苷，8号峰为大豆苷，9号峰为4ˊ‑甲氧基葛根素，10号峰为染料木素，11号峰为丹酚酸B，12号峰为刺芒柄花素，13号峰为kakkonein，14号峰香豆雌酚，15号峰为大豆苷元，16号峰为新隐丹参酮，17号峰为丹参酮；以葛根素为参照，计算得到葛根素‑7‑木糖苷、葛根素‑木糖苷、大豆苷、大豆苷元、丹参酮ⅡA的相对校正因子，分别为f_{葛根素‑7‑木糖苷/葛根素}：0.0363，f_{葛根素‑木糖苷/葛根素}：0.1840，f_{大豆苷/葛根素}：0.3999，f_{大豆苷元/葛根素}：0.0834，f_{丹参酮ⅡA /葛根素}：0.0921，检测各成分含量，得参葛舒心方中葛根素、葛根素‑7‑木糖苷、葛根素木糖苷、大豆苷、大豆苷元、丹参酮ⅡA的成分含量分别为：0.403%‑0.442%，0.007%‑0.008%，0.038%‑0.042%，0.236%‑0.252%，0.016%‑0.019%，0.024%‑0.027%。