[发明专利]特异探测膀胱癌细胞的分子遗传装置的构建方法有效
| 申请号： | 201410441470.1 | 申请日： | 2014-09-01 |
| 公开（公告）号： | CN104293819B | 公开（公告）日： | 2017-01-04 |
| 发明（设计）人： | 黄卫人;刘宇辰;蔡志明 | 申请（专利权）人： | 深圳市第二人民医院 |
| 主分类号： | C12N15/66 | 分类号： | C12N15/66;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 深圳鼎合诚知识产权代理有限公司44281 | 代理人： | 向武桥,彭家恩 |
| 地址： | 518035 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种特异探测膀胱癌细胞的分子遗传装置的构建方法，包括：构建质粒hUPII‑pSpCas9、构建质粒hTERT‑gRNA‑BAM、构建质粒pRL‑SV40‑LacI、构建质粒pcDNA3‑LacO‑hRluc和构建质粒pcDNA3‑LacO‑E‑cadherin。构建的分子遗传装置能够有效特异控制膀胱癌细胞并显著影响其恶性生物学行为，并能够有效检测膀胱癌细胞并增强荧光素酶基因的表达，便于科学研究。 | ||
| 搜索关键词： | 特异 探测 膀胱 癌细胞 分子 遗传 装置 构建 方法 | ||
【主权项】：
一种特异探测膀胱癌细胞的分子遗传装置的构建方法，所述其特征在于，包括：构建质粒hUPII‑pSpCas9；构建质粒hTERT‑gRNA‑BAM；构建质粒pRL‑SV40‑LacI；构建质粒pcDNA3‑LacO‑hRluc；构建质粒pcDNA3‑LacO‑E‑cadherin；将hUPII启动子片段插入质粒Cbh‑3X‑FLAG‑NLS‑SpCas9‑NLS的XbaI/AgeI位点，而构建所述质粒hUPII‑pSpCas9；将hTERT启动子和核酸酶序列围绕的引导RNA分子分别插入质粒pCMVp‑NEO‑BAM的XbaI/Sal I和Sal I/BamH I位点，而构建所述质粒hTERT‑gRNA‑BAM；将lacI基因序列插入质粒pRL‑SV40的NheI/XbaI位点，而构建所述质粒pRL‑SV40‑LacI；将lac操纵子序列和hRluc基因分别插入质粒pcDNA3的Hind III/Kpn I和BamH I/EcoR I位点，而构建所述质粒pcDNA3‑LacO‑hRluc；将人E‑cadherin cDNA序列插入pcDNA3‑LacO‑hRluc的BamH I/EcoR I位点，而构建所述质粒pcDNA3‑LacO‑E‑cadherin。
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