[发明专利]一种通用型鸭甲型肝炎病毒抗体ELISA检测试剂盒

摘要

本发明公开了一种通用型鸭甲型肝炎病毒抗体ELISA检测试剂盒。该试剂盒含有以鸭甲肝病毒DHAV-1VP3-3VP1重组蛋白包被的ELISA板。该重组蛋白是以下述方法获得：以DHAV-1和DHAV-3作为材料，分别对DHAV-1VP3基因和DHAV-1VP1基因进行扩增、克隆得到重组质粒pMD-1VP3和pMD-3VP1，然后定向串联插入到pET-32a(+)表达载体，筛选获得重组表达质粒pET-1VP3-3VP1，经ITPG诱导表达、纯化，获得DHAV-1VP3-3VP1重组蛋白。该试剂盒一次检测可对DHAV-1和DHAV-3两种抗体水平作出评价，成本低廉、操作简便、快速，适合批量样品的检测。

主权项

一种鸭甲型肝炎病毒DHAV‑1VP3‑3VP1重组蛋白，其特征是，由下述方法制备获得：1)以DHAV‑1病毒作为材料，通过RT‑PCR方法对其VP3基因进行扩增、克隆得到重组质粒pMD‑1VP3；2)以DHAV‑3病毒作为材料，通过RT‑PCR方法对其VP1基因进行扩增、克隆得到重组质粒pMD‑3VP1；3)以BamH I和Sal I同时对重组质粒pMD‑1VP3和pET‑32a(+)载体进行酶切，回收目的片段，16℃连接过夜，转化DH5α感受态细胞，提取质粒，经BamH I和Sal I双酶切鉴定正确后获得阳性重组质粒pET‑1VP3；以Sal I和Xhol I同时对重组质粒pMD‑3VP1和pET‑1VP3进行酶切，回收目的片段，16℃连接过夜，转化BL21(DE3)感受态细胞，提取质粒，经Sal I和Xhol I双酶切鉴定正确后获得阳性重组表达质粒pET‑1VP3‑3VP1；4)将获得的阳性质粒菌于37℃培养，待A600值达到0.4～0.6时，加入IPTG至终浓度为0.8mmol/L进行诱导表达，收集诱导表达后5h的菌体，超声波破碎，离心后取沉淀进一步分离纯化。