[发明专利]一种贵州半蒴苣苔的组织培养快速繁殖方法

摘要

一种贵州半蒴苣苔的组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤：取贵州半蒴苣苔顶芽作为外植体进行消毒；将消毒后的外植体置于MS基本培养基中诱导得到丛生芽；将所述丛生芽置于MS壮苗培养基中进行壮苗培养得到健壮植株；将所述健壮植株置于MS生根培养基中培养得到完整的带根苗；取完整的带根苗进行炼苗后移植于石灰岩土壤生长一个半月，再移栽至大田。采用本发明所述方法得到的种苗健壮、成活率高，可在短期内提供大量贵州半蒴苣苔的优质种苗，对贵州半蒴苣苔资源保护和可持续利用具有重要价值。

主权项

一种贵州半蒴苣苔组织培养快速繁殖方法，其特征在于该方法包括以下步骤：（1）外植体的选择与消毒：取贵州半蒴苣苔顶芽作为外植体，依次用2%洗洁精水溶液浸泡5‑10min、线状自来水冲洗10‑20min、添加2‑3滴吐温‑20的100 ml0.1%升汞消毒7‑9min、无菌水冲洗3‑5次，最后用灭菌滤纸吸去表面水分，剪成长约1cm长的外植体；（2）顶芽分化获得丛生芽培养：将步骤（1）得到的外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23‑26℃、光照强度1500lux、光照时间为10‑12小时/天的条件下培养25‑30天，顶芽分化后获得丛生芽，其中MS培养基中含0.5‑1.5mg/L的6‑BA、0.5‑1.0mg/L的NAA、25‑30g/L蔗糖和4.0‑4.5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；（3）丛生芽壮苗继代培养：将步骤（2）中得到的试管苗不定芽置于MS增殖培养基中，在培养温度23‑26℃、光照强度1500lux、光照时间为10‑12小时/天的条件下培养20‑25天得到完整的健壮植株，其中MS壮苗培养基中含1.0‑2.0mg/L的6‑BA、0.5‑1.0mg/L的NAA、0.5‑1.0mg/L KT,25‑30g/L蔗糖和4.0‑4.5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；（4）丛生芽生根培养：将步骤（3）中得到的健壮植株置于MS生根培养基中，在培养温度23‑26℃、光照强度1500lux、光照时间为10‑12小时/天的条件下培养25‑30天得到带根的完整植株，其中MS生根培养基中含1.0‑1.5mg/L的IAA、0.5 mg/L的ABT、25‑30g/L蔗糖和4.0‑4.5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；（5）炼苗与移栽：步骤（4）获得带根的完整植株后，在室温为25℃的室内散射光照射2‑4天，打开瓶盖，在瓶中加入少量自来水，炼苗2‑4天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基，立即移栽到通风良好且弱光石灰岩土壤中，在石灰岩土壤中生长一个半月后移栽大田。