[发明专利]利用Bacillus subtilis NAD+再生系统高效生物转化2,3-丁二醇生产乙偶姻

摘要

利用Bacillus subtilis NAD⁺再生系统高效生物转化2,3-丁二醇生产乙偶姻，属于基因工程领域。该发明克隆了来自本实验室自主筛选的具有独立知识产权的高产乙偶姻菌株B.subtilis JNA中乙偶姻还原酶与NADH氧化酶，并将其在B.subtilis JNA中过量共表达，为国内外首次通过NAD⁺再生系统在野生型高产乙偶姻枯草芽孢杆菌中高效转化2,3-丁二醇生产乙偶姻。对构建的基因工程菌株进行酶活力测定及胞内辅酶水平研究证明B.subtilis JNA/pMA5-bdhA-yodC能够持续有效地转化2,3-丁二醇生成乙偶姻。最终在40℃时，pH8.0及添加了5mM的MnCl₂的最优全细胞转化条件下，B.subtilis JNA/pMA5-bdhA-yodC可将120g/L2,3-丁二醇转化为约92.5g/L乙偶姻，乙偶姻产力达到2.31g/(L·h)，为目前报道枯草芽孢杆菌生产乙偶姻的最高水平，为微生物工业化生产乙偶姻提供了基础。

主权项

一种加强辅酶循环再生的重组枯草芽孢杆菌(B.subtilis)，其特征在于：将SEQ ID NO：1所示的乙偶姻还原酶基因bdhA和SEQ ID NO：2所示的NADH氧化酶基因yodC共同克隆到穿梭载体pMA5构建成为重组穿梭表达质粒pMA5‑bdhA‑yodC并转化至保藏编号为CCTCC NO：M209309的枯草芽孢杆菌B.subtilis JNA中，从而提高枯草芽孢杆菌利用2，3‑丁二醇全细胞转化生产乙偶姻的能力。