[发明专利]一种筛选高产苏氨酸菌株的方法

摘要

本发明涉及一种苏氨酸响应器的构建方法，及利用该响应器高通量筛选高产苏氨酸菌株的方法。建立苏氨酸响应器：苏氨酸能够与大肠杆菌体内转录因子gcvR相互作用，从而引起gcvTHP启动子的激活。根据该原理，利用gcvTHP启动子改造获得gcvTHP-mut启动子，并构建gcvTHP-mut启动子启动下游连接报告基因的苏氨酸响应器。利用苏氨酸响应器的实验结果表明：在一定的苏氨酸浓度范围下，随着苏氨酸浓度的增加，苏氨酸响应器的相对单位荧光升高。本发明能够从菌株库中筛选获得高产苏氨酸的菌种，为高通量的选育高产苏氨酸工程菌提供了有效方法。

主权项

一种筛选高产苏氨酸菌株的方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步骤：1)首先构建一种重组质粒，所述的重组质粒含有gcv启动子及受gcv启动子控制的报告基因；2)然后将重组质粒转化入待筛选的产苏氨酸的菌株中，然后将转化的菌株在含氨苄青霉素的LB培养基平板中37℃倒置培养过夜，得到需筛选苏氨酸的重组菌种；3)取LB平板上的单克隆至含有M9培养基的96孔板或者384孔板中，37摄氏度培养过夜，使用多功能酶标仪分别于550nm和600nm检测荧光值及吸收光，计算荧光值与吸收光的比值获得单位相对荧光值来表示苏氨酸的浓度。