[发明专利]一种盐霉素菌株

摘要

本发明公开了一种盐霉素菌株，分类命名为白色链霉菌(Streptomycesalbums)S-610-11，保藏编号为CCTCCM2012492。本发明采用常压常温等离子体诱变并结合高通量筛选方法获得盐霉素高产菌(Streptomycesalbums)S-610-11，可较大幅度提高盐霉素的含量，且稳定性好，菌株连续传代5次后盐霉素效价无明显变化。利用摇瓶发酵，盐霉素产量达56000u/ml，较出发菌株F₂-1^#提高了70%。本发明完全符合工业化盐霉素生产菌株的诱变和筛选需要，并可应用于工业化发酵生产，具有重大的经济价值。

主权项

一种盐霉素菌株，分类命名为白色链霉菌(Streptomyces albums) S‑610‑11，其特征在于盐霉素高产菌株的选育方法，具体步骤如下：（1）利用常温常压等离子体（ARTP）诱变出发菌株制备出发菌株的孢子悬浮液，并在无菌风下吹干，然后置于ARTP诱变系统中进行等离子体照射1～10min；将样品用生理盐水洗下，梯度稀释后涂布在平板培养基上，避光培养5～8d；（2）突变株高通量初筛挑取步骤（1）所得的单菌落突变株同时用无菌牙签点接种于两块分别装有1～6ml固体培养基和0.3~1.5ml液体发酵培养基的24、48或96孔板中，前者25～30℃静置培养4～8d,后者25～37℃、湿度50～90%、200～300r/min培养4～8d；培养后，检测各孔中发酵液的盐霉素含量，挑出产素水平高于出发菌株30%的突变株，即为初筛高产菌株；（3）突变株高通量复筛将步骤（2）所得的高产突变株的固体培养物用无菌牙签点接于装有0.8~1.5ml种子培养基的24、48或96孔深板中，25～37℃、湿度50～90%、200～300r/min振荡培养20～28h左右；以5～15%的接种量转接于装有0.8~1.5ml发酵培养基的24、48或96孔深板中，振荡培养6～9d；培养后，检测各孔中发酵液的盐霉素含量，挑出产素水平高于出发菌株30%的突变株，即为复筛高产菌株；（4）突变株摇瓶验证将步骤（3）所得高产菌株接种于装有20～50ml种子培养基的250ml摇瓶中， 25～35℃、200～300r/min 振荡25～30h左右；以5～15%的接种量转接于装有20～50ml种子培养基的250ml摇瓶中，继续振荡培养5～10d；（5）突变株遗传稳定性验证将经摇瓶验证过的高产菌株经250ml摇瓶连续培养3～5代。