[发明专利]基因组中目的基因的遗传改造方法有效
| 申请号： | 201410235732.9 | 申请日： | 2014-05-29 |
| 公开（公告）号： | CN104513829B | 公开（公告）日： | 2018-03-06 |
| 发明（设计）人： | 杨俊杰;孙兵兵;黄鹤;杨晟 | 申请（专利权）人： | 中国科学院上海生命科学研究院 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 上海一平知识产权代理有限公司31266 | 代理人： | 马莉华,崔佳佳 |
| 地址： | 200031 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及基因组中目的基因的遗传改造方法。提供了一种新的对基因组中目的基因进行遗传改造(如敲除、定点突变和/或基因敲入等)的方法。本发明的方法操作步骤简单、易于实施，改造准确性高、效率高，并且在改造结束后，基因组中无多余序列残留。 | ||
| 搜索关键词： | 基因组 目的 基因 遗传 改造 方法 | ||
【主权项】：
一种细胞基因组中目的基因的遗传改造方法，其特征在于，所述方法包括步骤：(1)提供第一构建物组，所述第一构建物组中包含至少一种结构如式I所示的第一构建物，AL‑B‑C‑B‑AR I其中，式I中AL为插入位置5’端同源臂序列；B为I‑SceI酶切位点；C为选择性标志基因；AR为插入位置3’端同源臂序列；(2)用第一构建物组中的第一构建物转化细胞，进行同源重组，得重组细胞；(3)提供第二构建物组，所述第二构建物组中包含至少一种结构如式II所示的第二构建物，B‑TL‑E‑TR‑B II其中，式II中B的定义如上所述，E为遗传改造片段或为无；TL为目的基因5’端同源臂序列；TR为目的基因3’端同源臂序列；(4)用第二构建物组中的第二构建物转化(2)的细胞，且在细胞内表达I‑SceI核酸内切酶，通过同源重组以“E”替换目的基因，从而实现细胞基因组中目的基因的遗传改造。
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