[发明专利]检测对苯二酚和邻苯二酚的共固定酶电极制备方法及应用

摘要

本发明提供了一种检测对苯二酚和邻苯二酚的共固定酶电极制备方法及应用，该制备方法是将酪氨酸酶和过氧化物酶固定到氧化石墨烯上得到共固定酶液，然后将共固定酶液和壳聚糖溶液依次滴涂在玻碳电极表面，得到检测对苯二酚和邻苯二酚的共固定酶电极，该电极成本低、操作简便、快速、灵敏、检测限低、选择性好，可以用于环境中微量对苯二酚和邻苯二酚的检测。

主权项

检测对苯二酚和邻苯二酚的共固定酶电极制备方法，包括以下步骤：步骤1，将氧化石墨烯在浓硫酸和硝酸的混合酸液中搅拌1‑2小时，再放入浓盐酸中超声1‑2小时，过滤并用去离子水清洗，室温干燥，得羧基化氧化石墨烯；氧化石墨烯与混合酸液的重量体积比为5‑15 mg:20‑60 mL，浓硫酸与硝酸体积比为2:1‑4:1；步骤2，将步骤1所得羧基化氧化石墨烯加入氯化亚砜和N,N‑二甲基甲酰胺的混合溶液中，60‑80℃水浴搅拌12‑48h，过滤，用无水四氢呋喃清洗，室温下真空干燥，得酰氯化氧化石墨烯；羧基化氧化石墨烯与混合溶液的重量体积比为5‑15 mg:50‑150 mL，氯化亚砜和N,N‑二甲基甲酰胺的体积比为10:1‑30:1；步骤3，将步骤2所得酰氯化氧化石墨烯加入乙二胺中，搅拌12‑48h，过滤，室温下真空干燥，得氨基化氧化石墨烯；酰氯化氧化石墨烯与乙二胺的重量体积比为5‑15 mg:20‑60 mL；步骤4，将步骤3所得氨基化氧化石墨烯加入pH为6.0‑7.0的缓冲溶液中，超声分散20‑40 min，得到质量浓度为1‑3mg/mL的石墨烯分散液；步骤5，取100‑300 μL步骤4所得石墨烯分散液与质量分数为2%‑10%的戊二醛反应，超声20‑40 min后在摇床上摇动1‑3h，得到溶液体系，备用；石墨烯分散液与戊二醛的体积比为0.5‑1.5:1；步骤6，在步骤5所得溶液体系中加入100‑300μL酪氨酸酶溶液和过氧化物酶溶液的混合酶液，反应1‑3h，得到共固定酶液；混合酶液中酪氨酸酶溶液与过氧化物酶溶液的体积比为1:1‑2:1，酪氨酸酶溶液与过氧化物酶溶液的浓度都是2‑10mg/mL，溶剂是pH为6.0‑7.0的缓冲溶液；步骤7，移取步骤6的共固定酶液滴涂于活化处理后的玻碳电极上，滴涂量为5‑20μL，4℃干燥，再移取质量分数为0.2‑1.0%的壳聚糖溶液滴涂于玻碳电极上；干燥后即得检测对苯二酚和邻苯二酚的共固定酶电极；共固定酶液与壳聚糖溶液的体积比为1:1‑3:1。