[发明专利]一种建立DOX调控的猪体细胞诱导重编程体系的方法有效
| 申请号： | 201410179808.0 | 申请日： | 2014-04-30 |
| 公开（公告）号： | CN103923877A | 公开（公告）日： | 2014-07-16 |
| 发明（设计）人： | 王华岩;段安琴;于童;王宁 | 申请（专利权）人： | 西北农林科技大学 |
| 主分类号： | C12N5/073 | 分类号： | C12N5/073 |
| 代理公司： | 西安亿诺专利代理有限公司 61220 | 代理人： | 康凯 |
| 地址： | 710000 陕西省杨凌西北*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 一种建立DOX调控的猪体细胞诱导重编程体系的方法，包括：1）猪胎儿成纤维细胞的原代分离培养；2）猪胎儿成纤维细胞重编程为第一代iPS；3）第一代iPS分化为猪第二代成纤维细胞；4）第二代成纤维细胞重编程为第二代iPS。本发明成功地建立了DOX诱导猪体细胞重编程体系，成功建立了四因子拷贝数一致的猪第一代iPS，获得了基因型一致的第二代成纤维细胞，成功使第二代成纤维细胞无需基因导入直接在DOX条件下就可以诱导形成第二代iPS；第二代成纤维重编程过程无需外源基因的重新导入，无需考虑病毒制备及感染效率，提高了实验的安全性；本发明为研究猪重编程机制及小分子化合物诱导重编程提供了新的资源。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 建立 dox 调控 体细胞 诱导 编程 体系 方法 | ||
【主权项】：
一种建立DOX调控的猪体细胞诱导重编程体系的方法，其特征在于：该方法包括：步骤1）猪胎儿成纤维细胞的原代分离培养；步骤2）将上述猪胎儿成纤维细胞重编程为第一代iPS；步骤3）第一代iPS分化为猪第二代成纤维细胞；步骤4）第二代成纤维细胞重编程为第二代iPS，具体实现方法为：4.1）将第二代成纤维细胞在+DOX的iPS培养条件下培养5d； 4.2）0.25%胰酶消化计数重铺于feeder上，2d后出现克隆；4.3）在体视显微镜下，将单个克隆挑出，撕成几份接于有feeder的48孔板，使其扩增至![]()
冻存于液氮中。
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