[发明专利]基于超级三明治DNAzyme的电化学细胞传感器的制备方法

摘要

本发明公开了基于超级三明治DNAzyme的电化学细胞传感器的制备方法，包括S1/S2-Fe₃O₄复合物的制备，超级三明治DNAzyme结构的形成，本发明还提供一种基于超级三明治DNAzyme的电化学传感器检测癌细胞的方法；本发明的有益效果是，超级三明治DNAzyme结构，利用其催化性能成功的实现对癌细胞的检测，并获得满意的结果，因此本发明的电化学细胞传感器可以应用于癌症的前期诊断方面。

主权项

一种基于超级三明治DNAzyme的电化学细胞传感器的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)制备S1/S2‑Fe₃O₄复合物：首先将10～200μL10mg/mL的羧基化磁珠用100～800μL10mM的咪唑‑盐酸溶液清洗三次，加入0.1～1.0mM1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨丙基)‑碳化二亚胺/0.1～1.0mM N‑羟基琥珀酰亚胺于37℃孵化30分钟激活磁珠表面的羧基，随后用100mM pH8.0的PBS缓冲液清洗；之后，加入10～100μL0.1～5.0μM K562适配体S1，37℃，反应16～24小时，并轻微的震动，将形成的S1‑Fe₃O₄复合物用磁铁分离，并用PBS缓冲液清洗；最后，加入10～100μL0.1～5.0μM的互补探针S2，37℃反应1～3小时，形成S1/S2‑Fe₃O₄复合物，并将复合物于4℃下保存以待后续使用；所述K562适配体S1的序列为：5'‑ATCCAGAGTGACGCAGCAGATCAGTCTATCTTCTCCTGATGGGTTCCTATTTATAGGT GAAGCTGGACACGGTGGCTTAGT‑(CH2)₆‑NH₂‑3'；互补探针S2的序列为：5'‑TGCGTCACTCTGGATACTAAAAGGGTCTGAGGG‑3'；2)基于超级三明治DNAzyme的电化学细胞传感器的制备首先将白血病细胞K562离心并用100mM PBS缓冲液水洗，得K562的细胞悬浮液，并将S1/S2‑Fe₃O₄复合物加入系列浓度的细胞悬浮液中，于37℃反应2～3小时；加入离心后的K562细胞时，适体S1与细胞强作用力迫使S1/S2双联结构打开，将S2释放到溶液中，磁性分离后，将修饰捕获探针S3的金电极浸入到S2溶液中，37℃反应1～3h以形成S3/S2双联；随后，在0.1～5.0μM S4、S5混合液中孵化2～4小时，并在0.2mM hemin及0.5mM MB溶液中浸泡2～4小时，以形成超级三明治DNAzyme，得到基于超级三明治DNAzyme的电化学细胞传感器；所述捕获探针S3的序列为：5'‑ATCCAGAGTGACGCATAACACCGGTGG‑(CH2)₆‑SH‑3'；信号探针S4的序列为：5'‑TACTCCCCCAGGTGCCCCTCAGACCCTTTTAGTGGTGGTGGTGGTTGTGGTGGTGGTGG‑3'，其中下划线部分能够形成G‑四联体DNAzyme；辅助探针S5的序列为：5'‑GCACCTGGGGGAGTAACTAAAAGGGTCTGAGGG‑3'。