[发明专利]一种大岩桐组培繁殖和块茎保存及其再繁殖的方法

摘要

本发明涉及一种大岩桐组培繁殖和保存及其再繁殖的方法，包括母株培养、外植体选择与消毒，在培养温度为26±2℃，光照培养时间为每天11～13h，光照强度为2500～5000lx条件下诱导分化；在500ml的三角瓶中继代扩繁；组培苗移栽，组培苗定植得到大岩桐组培苗木；组培苗保存及其再繁殖是将扩繁瓶子苗在500ml的三角瓶中培养，培养温度为16～28℃，光照强度为500～1500lx，光照时间为每天11～12h，瓶内结球，用块茎保存继代；瓶内块茎的复苏和进入下一周期的继代扩繁。本方法具有简单易行、效高价廉、繁殖速度快，不受时间和季节的限制，有利于高效繁殖，并应用于实际生产，具有较好经济效益、社会效益和生态效益。

主权项

一种大岩桐组培繁殖和保存及其再繁殖的方法，其特征在于：组培繁殖包括母株培养、外植体选择与消毒、诱导分化、继代扩繁、组培苗移栽、组培苗定植工序，得到大岩桐组培苗木；保存及其再繁殖的方法是将瓶子苗从扩繁转向瓶内结球、保存块茎的继代、瓶内块茎的复苏和进入下一周期的继代扩繁，其操作步骤如下：（1）母株培养：选用开过花或正在开花的盆栽大岩桐作为母株，适当追肥、修剪，促进大岩桐萌芽和植株的生长；（2）外植体选择与消毒：选择大岩桐健壮的腋芽或顶芽带下部枝条，剪成3～4 cm，在超净工作台上用70 %的乙醇浸润8～10秒，再用无菌水漂洗2次，然后将材料转移到已灭菌的广口瓶，用0.1 %的升汞消毒10～12分钟，最后用无菌水清洗5次；（3）诱导分化：将消毒好的外植体的两端切口分别剪去2～3 mm，将修剪好的外植体斜插在试管诱导培养基上，为了提高接种成功率，每只试管只插一个外植体进行诱导培养，培养温度为26±2 ℃，光照培养时间为每天11～13 h，光照强度为2500～5000 lx，15天后外植体膨大，25天后出现芽点；（4）继代扩繁：将试管接种成功的无菌材料转入装有继代培养基的500 ml三角瓶容器中，主要是通过腋生枝途径继代扩繁，少数接触到继代培养基的叶片也产生丛生芽，温度和光照同诱导培养条件，25～32天继代1次，每瓶有效瓶子苗20～40株；（5）组培苗移栽：移栽组培苗，苗床基质先用0.1 %的高锰酸钾淋透消毒1天后使用；移栽时先将3～6 cm高的组培丛生苗从三角瓶内夹出，清水洗去培养基，再将组培丛生苗分成单株，移栽到苗床上；（6）组培苗定植：组培苗在苗床上经过28～32天的驯化适应之后，挑选健壮植株移栽到装有定植基质的营养杯定植，定植后的杯苗1月后可以出售；（7）瓶内结球：完成组培苗生产任务后，剩余的继代扩繁瓶子苗作为备用材料进入保存阶段，保存阶段采用保存培养基在500 ml的三角瓶中培养，修剪结球瓶子苗；（8）保存块茎的继代：每隔3.5～4月，将瓶内结球从旧的保存培养基转入新的保存培养基，以避免三角瓶的棉塞连续使用太长时间而出现霉菌污染，保留块茎和其上部2.5～3 cm高的植株，其余材料剪掉丢弃，块茎逐渐增大，经过1年的保存，块茎直径可达4～7 mm；（9）瓶内块茎的复苏：当需要扩大生产时，将半休眠状态的块茎材料复苏唤醒，将保存的瓶内块茎和其上部植株整块转入诱导培养基，使块茎完全浸泡在半固态培养基中，20～30天块茎分化大量新芽，繁殖系数10以上，切分块茎，进入下一周期腋生枝继代扩繁阶段。