[发明专利]一种制备动物转基因阳性单细胞克隆的方法在审
| 申请号： | 201410097949.8 | 申请日： | 2014-03-18 |
| 公开（公告）号： | CN103937746A | 公开（公告）日： | 2014-07-23 |
| 发明（设计）人： | 吴珍芳;贺晓燕;张献伟;李紫聪;刘德武;石俊松;周荣 | 申请（专利权）人： | 广东温氏食品集团股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/87;C12N5/073 |
| 代理公司： | 广州市深研专利事务所 44229 | 代理人： | 陈雅平 |
| 地址： | 527439 *** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种制备动物转基因阳性单细胞克隆的方法，步骤为：（1）构建包括目的基因、荧光标记基因和药物筛选标记基因的质粒；（2）质粒转染已培养至对数生长期的宿主动物细胞；（3）经转染的细胞生长恢复后，进行消化、离心和重悬稀释，再置于荧光显微镜下，用内径20~80μm的吸针吸取表达荧光标记基因的单个细胞，分别接种至不同份的细胞培养基中；（4）各单个细胞生长成克隆团后，消化其中稳定表达荧光标记基因的细胞克隆团进行传代扩增，即得到转基因阳性单细胞的克隆。该方法转基因阳性单个细胞分离和接种技术操作简单快速、克隆形成率高，大大简化了不同转基因动物个体的检测鉴定工作，降低检测成本，省时省力。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 制备 动物 转基因 阳性 单细胞 克隆 方法 | ||
【主权项】：
一种制备动物转基因阳性单细胞克隆的方法，其特征在于，步骤如下：（1）构建包括目的基因、荧光标记基因和药物筛选标记基因的质粒；（2）步骤（1）获得的质粒转染已培养至对数生长期的宿主动物细胞；（3）质粒转染后的宿主动物细胞经过生长恢复后，进行消化、离心和重悬稀释，再置于荧光显微镜下，用内径20~80μm的吸针吸取表达荧光标记基因的单个细胞，分别接种至不同份的细胞培养基中；（4）各单个细胞生长成克隆团后，消化其中稳定表达荧光标记基因的细胞克隆团进行传代扩增，即得到转基因阳性单细胞的克隆。
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