[发明专利]一种动态调控苏氨酸外排转运蛋白基因表达生产L-苏氨酸的方法

摘要

本发明公开了一种动态调控苏氨酸外排转运蛋白基因表达生产L‑苏氨酸的方法本发明提供了一种构建重组菌的方法，包括如下步骤：将突变苏氨酸操纵子thrA^C1034TBC表达元件、阻遏蛋白基因表达元件和苏氨酸外排基因表达元件导入目的菌中，得到重组菌；所述苏氨酸外排基因表达元件包括苏氨酸外排基因、驱动该基因表达的诱导型启动子和位于二者之间的调控元件Ocmt。本发明的有益效果在于，根据基因表达对发酵对数期和稳定期苏氨酸生产的具体作用，有针对性的提出了苏氨酸外排转运蛋白基因的表达控制策略，开辟并且实践证明了新的提高苏氨酸的发酵量的方式，从而在实践上可用于细菌发酵生产苏氨酸，便于推广应用。

主权项

1.一种构建重组菌的方法，为如下A或B：A所示的方法包括如下步骤：将阻遏蛋白基因表达元件和苏氨酸外排基因表达元件导入出发细菌中，得到重组菌；B所示的方法包括如下步骤：将阻遏蛋白基因表达元件、苏氨酸外排基因表达元件和突变苏氨酸操纵子表达元件导入出发细菌中，得到重组菌；所述苏氨酸外排基因表达元件包括苏氨酸外排基因、驱动苏氨酸外排基因表达的诱导型启动子和位于二者之间的调控区；所述阻遏蛋白基因表达元件包括阻遏蛋白基因及驱动阻遏蛋白基因表达的启动子；所述突变苏氨酸操纵子表达元件包括突变苏氨酸操纵子和驱动突变苏氨酸操纵子表达的启动子；所述苏氨酸外排基因为下述(1)或(2)或(3)：(1)rhtC；(2)rhtC和rhtB；(3)rhtC、rhtB和rhtA；所述驱动苏氨酸外排基因表达的诱导型启动子为PT5；所述调控区为Ocmt；所述驱动阻遏蛋白基因表达的启动子为Pkm；所述突变苏氨酸操纵子为突变苏氨酸操纵子thrAC1034TBC；所述驱动突变苏氨酸操纵子表达的启动子为PPL；所述PT5的核苷酸序列为序列表中的序列3或4或5自5’末端第1‑59位核苷酸；所述Ocmt的核苷酸序列为序列表中的序列3或4或5自5’末端第60‑91位核苷酸；所述PPL的核苷酸序列为序列表中的序列1自5’末端第520‑687位核苷酸。