[发明专利]卵黄低密度脂蛋白的提取及与利福喷丁的融合技术

摘要

本发明涉及一种新的卵黄低密度脂蛋白的提取方法及其与利福喷丁的融合技术，其中卵黄低密度脂蛋白的提取包括：(1)蛋黄浆的制备；(2)硫酸葡聚糖纤维素亲和层析提取卵黄低密度脂蛋白；(3)透析除去盐分。卵黄低密度脂蛋白与利福喷丁的融合技术为：(1)利福喷丁水溶液的制备；(2)卵黄低密度脂蛋白与利福喷丁的融合；(3)硫酸葡聚糖纤维素亲和层析纯化融合药物；(4)透析除去盐分。本发明制备方法简单，反应条件温和，提取效率高，设备简单易控，所得卵黄低密度脂蛋白及其与利福喷丁的融合药物稳定性好，可应用于卵黄低密度脂蛋白提取、药物运载和食品乳化剂加工等领域。

主权项

一种卵黄低密度脂蛋白的制备方法，该方法包括如下步骤：(1)新鲜鸡蛋去除蛋清和黏着在蛋黄膜上的白色卵带。收集蛋黄到一个冷却的无菌烧杯中，加入二倍体积150mM NaCl溶液稀释，混合液在4℃用磁力搅拌器搅拌1h，10000g，4℃，离心45min，将蛋黄浆溶液转移到新的离心管，弃去沉淀物，在相同条件下离心后，将蛋黄浆溶液转移到新的离心管，加入四倍体积150mM NaCl溶液稀释。(2)将蛋黄浆溶液以1.5mL/min流速通过硫酸葡聚糖纤维素填料填充的亲和层析柱(Φ2.6*10cm)。(3)以150mM NaCl溶液淋洗层析柱至基线，流速1.5mL/min。(4)以1M NaCl，pH7.4，0.02％NaN₃溶液洗脱层析柱，流速为1.5mL/min，接收OD280nm＞基线的洗脱物。(5)将1M NaCl洗脱物对150mM NaCl，0.02％NaN₃溶液透析24h，中间换2次透析液，透析袋截留分子量为8000‑14000Da。(6)可选择使用PEG20000对产物进行浓缩，0.22μm滤膜过滤除菌。