[发明专利]聚乙二醇固定的桔小实蝇气味结合蛋白传感器的制备方法

摘要

本发明公开了一种聚乙二醇固定的桔小实蝇气味结合蛋白生物传感器的制备方法，利用标准的微电子机械系统工艺加工而成的圆线型叉指金电极，使用修饰的聚乙二醇处理圆线型叉指金电极表面，用于固定桔小实蝇气味结合蛋白，获得所述聚乙二醇固定的桔小实蝇气味结合蛋白传感器。本发明将桔小实蝇气味结合蛋白固定在圆线型叉指金电极上，用于水果挥发性气味物质的检测。该方法构建的聚乙二醇固定的桔小实蝇气味结合蛋白传感器可将桔小实蝇气味结合蛋白稳定、简便的固定在圆线型叉指金电极表面，进而检测水果挥发性气味物质，本发明制备的聚乙二醇固定的桔小实蝇气味结合蛋白生物传感器灵敏度高，检测下限低，特异性强。

主权项

一种聚乙二醇固定的桔小实蝇气味结合蛋白传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）加工圆线型叉指金电极阻抗传感器：以玻璃为基底，在玻璃基底（1）上磁控溅射钛化钨薄膜作为粘附层，接着磁控溅射金薄膜作为电极层；用AZ光刻胶光刻出圆线型叉指图形，再采用干法刻蚀将非电极区域刻蚀掉，得到圆线型叉指金电极（2）以及外接引脚（3），最后将芯片腔（7）用环氧树脂胶封在玻璃基底（1）上，制得圆线型叉指金电极阻抗传感器；（2）固定桔小实蝇气味结合蛋白，该步骤通过以下子步骤来实现：（2.1）首先，将圆线型叉指金电极（2）在由质量浓度为98%以上的浓硫酸和体积浓度为30%的双氧水溶液按体积比为7:3混合成的混合溶液中浸泡3‑5min，然后用超纯水冲洗3次以上，最后依次用无水乙醇和超纯水清洗上述的圆线型叉指金电极（2），用氮气吹干；（2.2）配制浓度为1.5mg/ml的聚乙二醇溶液，溶剂由无水乙醇和超纯水按体积比3:7混合组成；将聚乙二醇溶液滴加在圆线型叉指金电极（2）上至完全覆盖圆线型叉指金电极（2），在室温下静置24h，聚乙二醇中的巯基与圆线型叉指金电极（2）反应生成金硫键，进而将聚乙二醇固定于圆线型叉指金电极（2）上，之后再吸出芯片腔（7）的残留的聚乙二醇溶液；（2.3）分别加入体积均为聚乙二醇溶液一半的浓度为8mg/ml 的EDC（1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐）溶液和浓度为12mg/ml的NHS（N‑羟基琥珀酰亚胺）溶液，EDC溶液和NHS溶液的溶剂均为0.1M MES缓冲液，15min后，再加入NaHCO₃溶液调节pH至7.2‑7.4；（2.4）然后加入与聚乙二醇溶液等体积的浓度为67 μg/ml 的桔小实蝇气味结合蛋白溶液，桔小实蝇气味结合蛋白溶液的溶剂为0.1M PBS缓冲液，室温下静止2h，使得桔小实蝇气味结合蛋白与聚乙二醇溶液中的聚乙二醇的羧基作用形成稳定的酰胺键，进而形成酰胺键结构，然后吸出芯片腔（7）中残留的液体，再向芯片腔（7）中加满0.1M PBS缓冲液，静置5min后吸出PBS缓冲液，用于清洗未被固定的桔小实蝇气味结合蛋白，重复3次后即可获得聚乙二醇固定的桔小实蝇气味结合蛋白传感器，置于4℃条件下备用。