[发明专利]亚洲玉米螟OfAK基因及其编码蛋白和OfAK基因RNAi干扰工程菌株构建的方法

摘要

亚洲玉米螟OfAK基因及其编码蛋白和OfAK基因RNAi干扰工程菌株构建的方法，它涉及玉米螟OfAK基因片段及其RNAi干扰载体，本发明提供亚洲玉米螟精氨酸激酶部分cDNA序列及其RNAi干扰载体工程菌株构建，目的为降低亚洲玉米螟对几种杀虫剂的耐受性，增强玉米自身防御反应对亚洲玉米螟的作用，减少田间杀虫剂使用。本发明亚洲玉米螟OfAK基因序列如序列表Seq ID No：1所示。亚洲玉米螟OfAK基因编码蛋白的氨基酸序列如序列表Seq ID No：2所示。本发明OfAK基因RNAi干扰菌株，降低亚洲玉米螟对几种杀虫剂的耐受性，增强玉米自身防御反应对亚洲玉米螟的作用，满足绿色农业、安全农业的要求。

主权项

亚洲玉米螟OfAK基因RNAi干扰工程菌株的应用，其特征在于它用于增强玉米自身防御反应及高效氯酸菊酯、溴虫腈和氯虫腈农药对亚洲玉米螟的毒杀作用；所述的亚洲玉米螟OfAK基因的核苷酸序列如序列表Seq ID No：1所示；亚洲玉米螟OfAK基因RNAi干扰工程菌株构建的方法如下：一、OfAK基因克隆以由亚洲玉米螟三龄幼虫总RNA反转录而成的cDNA为PCR模板，采用如下引物：P1，5’‑GTAGATCTATGGTGGACGCCGCAAC‑3’；P2，5’‑GGAAGCTTGATCAGTTCAGCGATGCC‑3’；进行PCR扩增，扩增后，纯化PCR产物，回收纯化PCR产物；二、OfAK基因干扰工程菌株的构建使用BgIⅡ和HindⅢ分别酶切步骤一回收纯化的PCR产物和L4440载体，对酶切后的PCR产物和L4440载体进行连接，然后转入大肠杆菌HT115感受态细胞中，将验证为阳性的克隆进行测序，测序成功的菌株，即为亚洲玉米螟OfAK基因RNAi干扰工程菌株；所述的增强玉米自身防御反应是指增强经茉莉酸甲酯处理后的玉米自身防御反应。