[发明专利]一种改良的解磷菌分离鉴别及解磷能力测定方法

摘要

一种改良的解磷菌分离鉴别及解磷能力测定方法，取土壤样品并进行初筛和复筛，筛选出解磷菌，进行解磷能力的测定，以溶磷圈直径和培养液中含磷量来综合反映菌株解磷能力的强弱。本发明以溴酚蓝指示剂作为筛选标记，通过加入溴酚蓝作为解磷菌初筛的指示剂，通过观察溶磷圈进行复筛，可以有效、快速、直观的筛选出目标菌株。同时通过测定液体培养液中磷含量，对解磷菌的分解能力做到定量。

主权项

一种改良的解磷菌分离鉴别及解磷能力测定方法，其特征在于，包括如下步骤：A、解磷菌的初筛：配制改良的解磷菌分离培养基，配方为葡萄糖9‑10g/L、Ca3(PO4)2 4‑5g/L、(NH4)2SO4 0.5 g/L、NaCl 0.2 g/L、MgSO4 0.1 g/L、KCl 0.2 g/L、酵母膏0.1‑0.2 g/L、质量浓度0.4% 且pH 6.7的溴酚蓝6mL /L，同时加入制备好的质量浓度10%的土壤浸提液100 ml/L、琼脂粉15 g/L，培养基pH 7.0~7.2，将配制好的培养基于115℃灭菌20‑30分钟后倒板；称取25g土壤样品于225ml无菌生理盐水悬浮混匀，制成1:10的样品匀液，用1ml无菌吸管吸取1:10的样品匀液1ml注入盛有9ml无菌水的无菌试管中，制成1：100的样品匀液，以此类推，制备10倍系列稀释样品匀液，取3‑4个适宜浓度的稀释液0.1ml涂布于分离培养基上，28‑30℃倒置培养2‑3天，通过观察菌落周围培养基颜色变化情况，进而初步筛选解磷菌，若菌落周围培养基颜色由紫色逐渐变为黄色，则可初步确定该菌株为解磷菌，由此获取得到初筛菌株；B、解磷菌的复筛：配制解磷菌的固体复筛培养基，配方为葡萄糖9‑10 g/L、Ca3(PO4)2 5‑6 g/L、MgCl2 5 g/L、MgSO4 0.25 g/L、KCl 0.2 g/L、(NH4)2SO4 0.1 g/L、琼脂粉15 g/L，固体复筛培养基pH 7.0；将配制好的培养基于115℃灭菌20‑30分钟后倒板；基于步骤A所得初筛菌株，采用三点点植法将初筛菌株点接在固体复筛培养基上，28‑30℃培养6‑7天，观察菌落周围是否有溶磷圈，从而进一步判定是否为解磷菌，若菌落周围培养基沉淀逐渐消失变透明，出现明显的透明圈，则可确定初筛菌株为解磷菌；C、解磷能力的测定：分别配制液体复筛培养基和固体复筛培养基，液体复筛培养基和固体复筛培养基的配方均与步骤B的固体复筛培养基相同，采用测量溶磷圈直径和钼锑抗比色法测定液体培养液中磷含量来综合反映目标菌株解磷能力的强弱，具体步骤为：选取初筛菌株用点植法点接于固体复筛培养基上，28‑30℃培养6‑7天，测量溶磷圈直径；同时将初筛菌株按 1%的接种量接入液体复筛培养基中，以不接菌的培养液作为对照，于28‑30℃，200 rpm下振荡培养6‑7天，取培养液10000 rpm离心10 min，采用钼锑抗比色法测定培养液中含磷量；以溶磷圈直径和培养液中含磷量来综合反映菌株解磷能力的强弱。