[发明专利]口蹄疫灭活疫苗中间品或抗原146S含量的测定方法

摘要

本发明公开了一种口蹄疫灭活疫苗中间品或抗原146S含量的测定方法，该方法是利用经典的蔗糖密度梯度离心技术，将被检抗原直接加至蔗糖梯度顶部超速离心，再利用连续紫外检测器连续检测，根据抗原峰面积计算146S含量，从而达到快速、稳定检测口蹄疫灭活疫苗中间品或抗原146S的含量的目的。本发明过程简单，操作性强，周期短，且所需样品量少，重复性和稳定性好。为下一步研究疫苗中抗原含量与免疫后动物所获得的保护力之间的关系研究提供了保障，同时解决了疫苗生产中间品检测和成品口蹄疫疫苗体外检测方法的技术瓶颈。

主权项

口蹄疫灭活疫苗中间品或抗原146S含量的测定方法，其特征是，包括以下步骤：(1) 样品前处理，步骤如下：1) 在无菌条件下将中间品或抗原样品分装于灭菌管； 2) 将分装后的中间品平衡后置于高速台式离心机内，在 4℃条件下离心5min；3)吸取上清液即为试验用样品；(2)将实验用样品直接用于蔗糖密度梯度离心，步骤如下：1)使用自动梯度制备仪制备梯度；2)打开离心机进行自检测试，确保离心机可以正常运转；3)测试完成后，打开舱门，将样品加入蔗糖梯度上层，用配制好的TNE缓冲液两两平衡，放入离心管内，拧紧离心管盖子，再将相应数字的离心管挂到水平离心管架上，放入离心机内，并记录样品号与相对应的离心管号后盖上离心盖，关闭舱门；4)开始离心离心参数如下：转速为35000rpm/min温度为10℃时间为3h5) 离心结束后，取出离心管，拧开离心管盖子，取出蔗糖梯度，弃掉上层液体，将离心后的样品放置4℃待检；(3) 通过使用连续紫外检测仪器，对离心后的样品进行连续检测: 在259nm波长下测定紫外吸光度,并根据紫外吸光度记录并保存检测曲线；(4) 根据检测出的曲线，对146S抗原峰手动积分，结合1µg口蹄疫146S抗原的峰面积（321.4mAU.s）,计算样品146S抗原含量，从而得到所需数据。