[发明专利]一种脑组织快速冰冻切片的制备方法

摘要

本发明公开了一种脑组织快速冰冻切片的制备方法。本发明利用经过丙酮作为冰冻包埋剂及液氮中间介质，不但可以使脑组织达到速冻的效果，还能使脑组织有效的减少冰晶的形成，其次，本发明通过对影响冰冻切片制作质量的因素，例如取材、切片时的温度以及切片后的固定、储存条件等进行优化，进一步保证了最后制备得到的切片的质量。通过本发明方法获得的脑组织快速冰冻切片为下一步对脑组织进行免疫荧光、免疫组化以及原位杂交实验提供一种具有稳定性、能够很好的保护好抗原及酶活性的冰冻切片，为将来的有关神经系统疾病的临床诊断及科学研究提供符合要求的病理切片。特别对科学研究不经过灌注处理的小鼠的其它组织还可以进行分子及生化指标的检测。

主权项

一种脑组织快速冰冻切片的制备方法，其特征在于依次包括样本取材及冻存、冰冻切片的制作以及冰冻切片的HE染色、封片步骤，其中所述的样本取材及冻存包括以下步骤：（1）制备圆柱形无盖锡纸盒，要求底面平整，用于装冰冻包埋剂OCT；（2）制备底面组织快速冰冻装置，所述装置中利用预冷丙酮隔开组织与液氮；（3）将处死后的小鼠的脑组织取出，根据需要进行切面，厚度1.5‑2.5毫米；（4）将脑组织切面放入步骤（1）中装有冰冻包埋剂OCT的锡纸盒的底部且靠近中间的位置，要求脑组织切面完全浸入OCT中，尽量减少气泡；（5）将步骤（4）的装有脑组织切面的锡纸盒放入步骤（2）的预先装有预冷丙酮的组织快速冰冻装置，然后放入液氮中，且液氮表面不没过组织快速冰冻装置，30～50秒钟待OCT包埋剂中心变白时取出组织快速冰冻装置，放入‑80℃冰箱保存备用。