[发明专利]一种重组人血小板生成素的制备方法及其制剂

摘要

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及到一种重组人血小板生成素的制备方法及其制剂。本发明的制备方法为：设计PCR引物扩增目的基因，构建重组表达质粒，筛选高表达细胞克隆，培养工程细胞，纯化。其中，纯化的步骤为：超滤浓缩、DEAE离子交换层析、Source15反相层析、超滤浓缩、分子筛层析。本发明还涉及一种含有重组人血小板生成素的制剂，所述的制剂为液体制剂，含有重组人血小板生成素、稳定剂和缓冲盐，稳定剂为磺丁基醚β环糊精，浓度为1～2wt%。本发明的方法制备得到的重组人血小板生成素的纯度为98.0～99.9%，活性为3.0×105～3.6×105U/mg，并且重组人血小板生成素的得率提高。

主权项

一种重组人血小板生成素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）设计PCR引物扩增目的基因：将人胚肾细胞获得的TPO‑cDNA序列与设计的引物进行扩增，扩增重组人血小板生成素cDNA序列的PCR引物为：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；（2）构建重组表达质粒：将质粒pL101和扩增得到的TPO‑cDNA重组，得到重组pL101/TPO质粒；（3）筛选高表达细胞克隆：pL101/TPO转化至CHO细胞后通过反复转染、硫氨甲硫氨酸筛选获得高表达的克隆细胞，作为工程细胞；（4）培养工程细胞；（5）纯化：培养获得的上清液依次采用第一次超滤、DEAE离子交换层析、Source15反相层析、第二次超滤浓缩、分子筛层析的纯化手段获得重组人血小板生成素。